抗hsv -1活性gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD，一种从真菌中分离出来的环五肽gydF4y2Ba曲霉属真菌gydF4y2Basp. SCSIO 41501gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

单纯疱疹病毒1号是属于疱疹病毒科的包膜DNA病毒，可扩散到神经元，引起中枢神经系统的病理改变。本研究的目的是探讨黄芩的抗病毒活性及其机制gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD，一种环五肽，从海洋柳龙果衍生真菌的培养液中分离出来gydF4y2Ba曲霉sp. SCSIO 41501gydF4y2Ba目前，关于其抗肿瘤、抗凝血、抗氧化和免疫炎症作用的研究较多gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD，但对抗hsv -1活性的研究很少gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

的抗hsv -1活性gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba用斑块减少试验评价D。从有效阶段确定其对HSV-1的作用机制。然后分别检测病毒DNA复制、病毒RNA合成和蛋白表达。我们还通过质谱鉴定了与gB相互作用的蛋白质，并分析了gB的作用gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对病毒gB蛋白与细胞蛋白相互作用的影响gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

斑块减少实验表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD不影响HSV-1早期感染事件，包括病毒失活、附着和穿透。有趣的是,gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD显著降低了病毒晚期蛋白gB的基因和蛋白水平，并抑制了其在内质网和高尔基体中的位置。相反，过表达gB可以恢复病毒产量。最后，通过蛋白质组学分析发现，与gB蛋白相互作用的细胞蛋白数量大大减少gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD.这些结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD抑制gB功能影响HSV-1细胞间扩散。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

我们的结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD可能是治疗HSV-1的潜在候选药物，特别是对acv耐药菌株。gydF4y2Ba

单纯疱疹病毒1型(HSV-1)是一种包膜DNA病毒，属于疱疹病毒科，可传播到神经元，引起中枢神经系统的病理改变[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba］．HSV-1病毒颗粒由衣壳包裹的核心和线性双链DNA组成;病毒衣壳外有一个包含各种糖蛋白的外包膜，覆盖着被膜蛋白[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba］．HSV-1包膜包含至少14种不同的蛋白质[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba]，但入境时只需要gB、gD、gH和gL 4个，这是通过分析含有单基因缺失的HSV-1突变体的传染性建立的[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。gB是最保守的糖蛋白，是一种III类病毒融合蛋白，直接参与病毒与宿主细胞膜的相互作用和融合[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

目前临床上应用的抗病毒药物大多是核酸类似物，它们都是针对病毒DNA复制过程的。一个典型的例子是阿昔洛韦(ACV)。因此，耐药HSV株，特别是acv耐药HSV株，经常被发现[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba］．因此，开发具有不同作用机制的新型抗hsv药物迫在眉睫。gydF4y2Ba

许多海洋多肽是从海藻、鱼类、软体动物、甲壳类、螃蟹和海洋细菌和真菌中提取的，根据其结构特征、氨基酸组成和序列，显示出多种生物活性，如抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、免疫炎症作用和其他药物特性[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．在我们之前的研究中，gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba从该菌株中分离得到一种新的环五肽DgydF4y2Ba曲霉属真菌gydF4y2Basp. SCSIO 41501为白色固体，分子式为C40H49N5O8(图;gydF4y2Ba1gydF4y2Ba) (gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．在本研究中，我们进一步研究了黄芪的抗病毒活性及其机制gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对抗HSV-1和acv耐药菌株。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

化学品和试剂gydF4y2Ba

环五肽，gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD，是从Aspergillus SCSIO 41501真菌菌株中分离得到[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．ACV(阿昔洛韦)和2-(2,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基- 2h -四唑溴化铵(MTT)是从SigmaAldrich (St. Louis, MO, USA)获得的。Trizol试剂购自Invitrogen公司(Carlsbad, CA, USA)。Dulbecco的改良Eagle培养基(DMEM)、胎牛血清(FBS)和青霉素-链霉素均购自Gibco-BRL (Gland Island, NY, USA)。gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD和ACV用二甲亚砜(DMSO)溶解，DMSO最终浓度小于0.1%。限制性内切酶购自Takara Bio(志贺，日本)。gydF4y2Ba

细胞和病毒gydF4y2Ba

非洲绿猴肾细胞(Vero;ATCC CCL81)在添加10%热灭活胎牛血清的DMEM中培养。用于病毒稀释的维持培养基是DMEM和2%热灭活胎牛血清。HSV-1/F (ATCC VR-733)保存于本实验室。HSV-1/Blue，源自HSV-1的TK突变体[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]，两株临床抗acv的HSV-1株(HSV-1/106和HSV-1/153)是陶鹏(中国科学院广州生物医学与健康研究所)赠送的礼物。所有病毒都在Vero细胞中繁殖，并在−80°C保存，直到进一步使用。gydF4y2Ba

MTT试验gydF4y2Ba

MTT检测按照标准方案进行。简单地说，Vero细胞在96孔板中培养。待细胞融合度达到90%后，在培养皿中加入不同浓度的化合物，每种浓度重复3次。培养48 h后，每孔加入10 μl MTT溶液(5 mg/mL)，暗处培养4 h。然后丢弃MTT溶液，每孔加入100 μl DMSO。平板在室温下轻轻摇动15分钟。用酶免疫分析仪(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)测量每孔570和630 nm处的光密度(OD)。50%细胞毒浓度(CC50)定义为降低50%细胞活力的浓度。gydF4y2Ba

用空斑法测定病毒滴度gydF4y2Ba

Vero细胞在96孔板中培养。第二天，在感染前准备10倍的与未处理的HSV-1提取物连续稀释。用不同稀释度的100 μl HSV-1感染Vero细胞单层，在37℃、5% CO条件下吸附2 hgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba．将未吸收的病毒吸出，然后将平板覆盖含有营养培养基的琼脂，在37°C和5% CO下孵育gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba3天。用结晶紫染色细胞，并在50 h内计数，观察斑块。斑块试验分为3个重复。病毒用连续稀释滴定法定量。TCID50(50%组织培养感染剂量)采用Reed和Muench法公式计算[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]:gydF4y2Ba

Log10 50%终点稀释度= Log10稀释度表示死亡率高于50% -(对数的差值×稀释系数的对数)。gydF4y2Ba

对数差值=[(稀释后死亡率高于50%)-50%]/[(稀释后死亡率高于50%)-(稀释后死亡率低于50%)]。gydF4y2Ba

斑块减少试验gydF4y2Ba

用病毒悬液感染含有融合单层Vero细胞的24孔板的实验孔，每孔产生50个空斑。37°C和5% CO2孵育2小时后，吸出未吸收的病毒粒子。gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba将D溶液(分别为25 μM、12.5 μM、6.25 μM、3.125 μM、1.5625 μM和0.78125 μM)加入相应孔中，再加入含有琼脂的营养培养基;培养皿在37°C和5% CO2下孵育3天。斑块计数方法如上所述。抗病毒活性计算公式如下:gydF4y2Ba

病毒灭活试验gydF4y2Ba

将Vero细胞培养至24孔板(1.5*10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba接种病毒100 μl(每孔50 PFUs)，接种病毒100 μlgydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba将不同浓度的D溶液混合，在37°C下孵育2 h。然后将混合物添加到细胞孔中，在37°C下孵育2小时。接种物被移除。细胞补盖3天后固定，按上述方法染色。gydF4y2Ba

病毒附着试验gydF4y2Ba

将Vero细胞培养至24孔板(1.5*10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba细胞/孔)，第二天细胞在4°C预冷却1 h，用冷PBS冲洗。病毒接种量(每孔50pfus)和gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba将指定浓度的D添加到细胞孔中，在4°C下再孵育2小时，使病毒附着在细胞上。去除病毒接种体。细胞补盖3天后固定，按上述方法染色。gydF4y2Ba

病毒渗透试验gydF4y2Ba

将Vero细胞培养至24孔板(1.5*10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba细胞/孔)，第二天细胞在4°C预冷1小时，用冷PBS洗涤，然后在4°C感染病毒(每孔50 pfu)再感染2小时，使病毒附着在细胞上。之后，去除病毒接种物，用冷PBS冲洗细胞。然后不同浓度的gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba加入D，在37°C下孵育10分钟，以使病毒渗透最大化。孵育后，每孔中加入PBS (pH = 3) 1分钟，使未能穿透细胞的病毒失活。之后，将溶液中和，去除中性PBS。细胞补盖3天后固定，按上述方法染色。gydF4y2Ba

病毒感染后的治疗效果gydF4y2Ba

Vero细胞在24孔板中培养。第二天，在37°C下，用HSV-1(每孔50 pfu)感染细胞2小时。感染后，去除病毒接种体，用PBS冲洗细胞，覆盖gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD在指定浓度下。3天后，细胞固定，如上所述染色。gydF4y2Ba

HSV-1 DNA合成分析gydF4y2Ba

Vero细胞在24孔板中培养。第二天，将感染HSV-1的细胞(MOI = 3)在含或不含HSV-1的情况下孵育gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD (25 μM)保温15 h。使用GeneJET病毒DNA和RNA纯化试剂盒(Thermo)提取病毒DNA。采用RT-PCR法定量检测病毒DNA。然后相对于病毒对照组表达HSV-1基因组拷贝数。引物对如下:gydF4y2BaUL47gydF4y2Ba(f: 5 ' -gacgta cgcgat gag atc aa -3 '， r: 5 ' -gtt acc gga tta CGG gga ct-3 ')。gydF4y2Ba

实时聚合酶链反应gydF4y2Ba

Vero细胞在6孔板中培养。第2天感染HSV-1的细胞(MOI = 3)用gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD (25 μM)处理3、6、9 h。使用Trizol (Invitrogen)分离总RNA，并使用PrimeScript RT试剂盒(Takara)进行cDNA合成。实时荧光定量PCR (Real-time PCR, RT-PCR)检测即刻早期(IE)基因的表达水平gydF4y2BaUL54gydF4y2Ba早期(E)基因gydF4y2BaUL52gydF4y2Ba晚期(L)基因gydF4y2BaUL27gydF4y2BaHSV-1/F和HSV-1/106在3,6和9 h pi。,分别。引物对与前文所述相同[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

免疫荧光分析gydF4y2Ba

Vero细胞在共聚焦培养皿中培养，第二天细胞感染HSV-1 (MOI = 3)， 37°C 2 h进行病毒吸附。将细胞转入加25 μM或不加25 μM的主培养基中gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Bas D并孵育9小时。细胞用4%多聚甲醛(PFA)固定15分钟，用0.02% Triton X-100渗透，均在PBS中，随后用抗gb抗体(Abcam)和Alexa Fluor 488(1:1000)二抗(Invitrogen)孵育60分钟。然后用高尔基追踪器红或er追踪器红(Beyotime, China)对细胞进行染色。每一步之后用PBS反复清洗载玻片，最后用PBS保存。用4,6-二氨基氨基-2-苯基吲哚(DAPI，分子探针)进行额外的核染色20分钟。在共聚焦激光扫描显微镜(LSM 510 meta;蔡司)[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

西方墨点法gydF4y2Ba

Vero细胞接种于密度为1.5 × 10的60mm细胞培养皿中gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba细胞/菜。24 h后，细胞在37℃感染HSV-1 (MOI = 3) 2 h。DMEM维护介质包含gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Bas D (25 μM)。在感染后6和9小时，用PBS清洗细胞三次，并使用RIPA缓冲液(Beyotime)进行裂解。等量(40 μg/样)蛋白进行Western Blot分析。采用抗HSV-1一抗ICP0 (abcam1:1000)、ICP8 (abcam1: 8000)、VP5 (santa1:1000)、gB (abcam1:1000)、gD (abcam1:1000)检测即早、早、晚蛋白含量变化[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

免疫共沉淀(co-IP)和LC-MS分析gydF4y2Ba

Vero细胞在100mm细胞培养皿中，密度为3 × 10gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba细胞/菜。24 h后，用gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD (25 μM)，感染HSV-1 (MOI = 3) 9 h。然后将细胞裂解，测量蛋白质浓度，并将其调整为1 mg/ml。加入1.0 μg适当对照IgG(正常小鼠或兔IgG，对应一抗宿主种)，再悬量20 μl Protein A/G PLUSA琼脂糖，预清除裂解液。然后，在4°C下孵育30分钟。将最佳稀释度的一抗加入细胞裂解液(上清液)中，4℃孵育1 h，再用30 μl重悬量的Protein A/G plus -琼脂糖在4℃孵育过夜。收集免疫沉淀，PBS洗涤，20 μl 1 × SDS PAGE缓冲液重悬(Beyotime, China)。LC-MS分析由华大基因(中国)提供。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

结果以均数±标准差计算，用Student 's t检验检验是否有统计学意义。gydF4y2BaPgydF4y2BaP <0.05为差异有统计学意义。gydF4y2Ba

细胞毒性和抗hsv -1活性gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaDgydF4y2Ba

目的:研究gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD在Vero细胞上，采用MTT法。>浓度为25 μM时，细胞活力显著降低，CC50值为208.723±9.717 μM(图2)。gydF4y2Ba1gydF4y2Bab).其次是gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对抗HSV-1/F和三株acv耐药株，包括HSV-1/Blue(来源于HSV-1的TK突变株)和两株临床HSV-1株HSV-1/106和HSV-1/153 [gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]，通过斑块减少试验监测(图;gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)，清楚地显示gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD以剂量依赖的方式抑制HSV-1/F和acv耐药菌株的感染。如表所示gydF4y2Ba1gydF4y2Ba的50%有效浓度(EC50)gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD和ACV抑制HSV-1/F的浓度分别为7.928±0.511 μM和3.606±0.302 μM。的EC50值gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba对HSV-1/153、HSV-1/106和HSV-1/Blue的D分别为8.277±1.249 μM、10.486±0.929 μM和7.9875±0.616 μM。ACV对3种耐药菌株的EC50均大于40 μM。总之，这些结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对acv耐药HSV-1株有明显的抗病毒作用。gydF4y2Ba

抗病毒活动模式gydF4y2Ba

接下来，我们分析了HSV-1生命周期的哪个步骤受到影响gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD.进行空斑试验以证明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD以剂量依赖的方式显著减少HSV-1感染(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Baa).此外，hsv -1诱导的斑块大小大大减小(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2BaB)，意味着病毒粒子的产生减少。然后进行病毒灭活试验、病毒渗透试验和病毒附着试验gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对病毒灭活、附着和穿透无明显影响(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba一部)。这些结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD影响病毒晚期感染事件，如复制和释放。gydF4y2Ba

的影响gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对病毒基因和蛋白表达的影响gydF4y2Ba

以确定是否gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD影响病毒DNA复制，病毒DNA从处理或不处理的Vero细胞中提取gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD，检查UL47的拷贝数。如图(图;gydF4y2Ba4gydF4y2Ba一个),gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对UL47的产量无影响。分析…的效果gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对HSV-1基因表达的影响，病毒即早基因mRNA表达水平(gydF4y2BaUL54gydF4y2Ba)，早期基因(gydF4y2BaUL52gydF4y2Ba)和晚期基因(gydF4y2BaUL27gydF4y2Ba)分别在3,6,9 h pi进行定量。，分别(图;gydF4y2Ba4gydF4y2Bab)。有趣的是,gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD的表达明显降低gydF4y2BaUL27gydF4y2Ba，对的表达无显著影响gydF4y2BaUL54gydF4y2Ba而且gydF4y2BaUL52gydF4y2Bawestern blotting实验一致证明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD降低了病毒晚期基因编码的病毒晚期蛋白gB的蛋白水平gydF4y2BaUL27gydF4y2Ba)，不影响病毒立即早期蛋白ICP0、早期蛋白ICP8、晚期蛋白VP5和gD(图2)。gydF4y2Ba4gydF4y2Bac).此外，免疫荧光实验显示，经治疗后，内质网和高尔基体中gB的表达和定位大幅降低gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bae和f)，考虑到gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对病毒附着和渗透无显著影响(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2BaC-f)，可以合理地推断gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD抑制gB影响病毒的组装，释放和细胞间传播，如病毒减少斑块大小所示(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bab).确认是否gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD通过gB发挥抗病毒活性，我们构建了ha标记的gB质粒，并测试了过表达gB对病毒效价的影响(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bag)。的确，gB过表达明显增强了HSV-1感染，并恢复了一些减少的病毒产量gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD.综上所述，上述结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD降低病毒gB的表达和定位影响HSV-1感染。gydF4y2Ba

的影响gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD关于病毒gB和细胞蛋白之间的相互作用gydF4y2Ba

最后，我们进行了蛋白质组学分析，以评估效果gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD除以gB。采用免疫共沉淀法(Co-IP)提取病毒晚期与gB相互作用的不同蛋白，并通过质谱(MS)进行鉴定。根据维恩图，在HSV-1感染中，与gB蛋白相互作用的蛋白有78个，存在时减少到37个gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Baa).接下来进行COG (Cluster of Orthologous Groups of Proteins)注释分析，预测这些蛋白可能的功能，我们发现gb互作蛋白通过gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD主要参与翻译、核糖体结构、生物发生、翻译后修饰、蛋白质周转、伴侣和细胞骨架(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bab).此外，KEGG通路富集分析表明，这些被还原的gb相互作用蛋白主要富集在核糖体相关通路(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bac)、紧密连接、调节肌动蛋白骨架及内吞作用(图;gydF4y2Ba5gydF4y2Bad).在这些蛋白中，整合素β 1可能是一个关键蛋白，它在三个通路中起着关键作用。gydF4y2Ba

海洋为发现潜在的治疗药物提供了巨大的资源。在过去的几十年里，人们在海洋生物中发现了许多有趣的化合物[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba，gydF4y2Ba22gydF4y2Ba］．在这里，我们证明了这一点gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD，从真菌Aspergillus sp. SCSIO 41501中获得的一种新的环五肽[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]，对HSV-1和acv耐药株表现出明显的抗病毒活性。我们还研究了其抗病毒作用的可能机制。gydF4y2Ba

斑块减少实验表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD具有显著的抗病毒作用，且呈浓度依赖性。gydF4y2Ba3.gydF4y2Baa)，但对HSV-1早期感染事件无显著影响，包括失活、附着和穿透。更详细的研究表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD显著降低了病毒晚期蛋白gB的基因和蛋白水平(图;gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)．此外,gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD降低了gB在内质网和高尔基体中的定位。gydF4y2Ba

进入目标细胞是病毒感染的第一步[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．疱疹病毒的核心进入机制由gH、gD、gL和gB蛋白组成。疱疹病毒gB蛋白是III类病毒融合蛋白[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．一旦gB被触发，其融合环(FLs)插入到目标宿主细胞脂质双分子层，随后gB重折叠以驱动膜合并和感染的发生[gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．我们的研究结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD对病毒灭活、附着和穿透无显著影响，但可显著降低gB蛋白的表达。这些结果表明gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD影响gB蛋白的合成，以减少HSV-1细胞间传播，因为病毒斑块大小大大减小(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bab).的抗病毒机制gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD与ACV不同，这可能是其具有显著抗病毒作用的原因gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2Ba抗acv菌株(HSV-1/106, HSV-1/ Blue和HSV-1/153)的D。gydF4y2Ba

进一步分析gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD在gB上，识别出与gB蛋白相互作用的细胞蛋白(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)．gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD显著降低了参与翻译、核糖体结构、生物发生的gb互作蛋白;翻译后修饰，蛋白质周转，伴侣和细胞骨架。KEGG通路富集分析表明，这些蛋白主要富集在核糖体、紧密连接、调节肌动蛋白细胞骨架、致病相关通路gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba感染和内吞作用。其中整合素- 1在三种途径中起关键作用，可能是其中的关键蛋白。整合素是细胞表面异二聚体糖蛋白，有助于多种功能，包括细胞-细胞和细胞-基质的粘附和信号转导途径的诱导[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba］．最近，研究证明整合素β 1在hsv -1感染细胞的核膜上积累并与CD98hc形成复合物(26)。整合素β 1的敲除导致原核周围空间和核膜邻近的膜内陷结构中原始包膜病毒粒子的异常积累，这表明整合素β 1在HSV-1核出口和组装中起着关键作用[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba］．进一步的研究受到启发，以调查是否gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD影响整合素β 1在HSV-1晚期感染中的可能功能。gydF4y2Ba

总结这些数据，gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD被评估为HSV-1治疗的潜在候选，特别是对acv耐药菌株。gydF4y2Ba

当前研究的所有数据均可根据要求从通讯作者处获得。gydF4y2Ba

• 2020年4月1日gydF4y2Ba

  在原文章[1]发表后，我们被通知这篇文章的标题有一个错别字。gydF4y2Ba

无环鸟苷:gydF4y2Ba

无环鸟苷gydF4y2Ba

Co-IP:gydF4y2Ba

CoimmunoprecipitationgydF4y2Ba

CPE:gydF4y2Ba

细胞病理效应gydF4y2Ba

DMEM:gydF4y2Ba

杜尔贝科改良的鹰牌中号gydF4y2Ba

DMSO溶液:gydF4y2Ba

二甲亚砜gydF4y2Ba

1型单纯疱疹病毒:gydF4y2Ba

单纯疱疹病毒1gydF4y2Ba

我:gydF4y2Ba

感染多重性gydF4y2Ba

PBS:gydF4y2Ba

磷酸盐gydF4y2Ba

TCIDgydF4y2Ba_50gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

50%组织培养感染剂量gydF4y2Ba

作者感谢齐淑华提供了孤立的gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD。gydF4y2Ba

感谢国家自然科学基金项目(资助号:81573471,81673326)和国家重点研究与发展计划项目提供的资金支持;广东省国际合作计划项目(批准号2015A050502028);广州市产学研协同创新重大项目[批准号201504291048224];广东省科技计划项目[批准号2016A040402033];广东省生物工程药物重点实验室[批准号2014B030301050-5];青海省基础研究项目[2016-ZJ-712];广东省自然科学基金[2019A1515010046]。gydF4y2Ba

作者指出gydF4y2Ba

1. 王昭阳和贾娇燕对这项工作同样有贡献。gydF4y2Ba

作者及隶属关系gydF4y2Ba

1. 广州济南生物医药研发中心，暨南大学国家遗传医学工程研究中心，广东广州gydF4y2Ba

   王昭阳，贾角燕，王璐，李峰，王一亮，姜玉洲，宋晓伟，秦树荣，任哲，王一飞gydF4y2Ba

2. 深圳大学药学院，健康科学中心，中国深圳gydF4y2Ba

   Kai郑gydF4y2Ba

3. 青海民族大学青藏高原植物化学重点实验室，青海西宁810007gydF4y2Ba

   你们居gydF4y2Ba

4. 中国科学院南海海洋研究所，中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室，广东广州新港西路164号，510301gydF4y2Ba

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贡献gydF4y2Ba

ZR, YW, ZW和JJ构思并设计了该研究。JY, SQ提供的分离gydF4y2BaAspergillipeptidegydF4y2BaD. ZW、JJ、XS、SQ和YJ分别进行实验并对数据进行分析。ZW, FL和YW画了图。ZW, JJ和KZ撰写了论文。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba哲任gydF4y2Ba，gydF4y2BaYifei王gydF4y2Ba或gydF4y2Ba舒化气gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

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相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者声明没有利益冲突。资助者在研究的设计中没有任何作用;分析:在数据的收集、分析或解释中;无论是手稿的撰写，还是发表结果的决定。发表同意书。gydF4y2Ba

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