细菌性软骨坏死伴骨髓炎gydF4y2Ba肠球菌cecorumgydF4y2Ba分离株在遗传上不同于共生种群，在胚胎死亡率模型中毒性更强gydF4y2Ba

细菌性软骨坏死伴骨髓炎(BCO)是肉鸡跛行的常见原因。在BCO病变中发现的细菌是肠道细菌，它们被认为通过肠上皮易位并已全身扩散。在BCO病例中经常分离出的一种特定细菌是gydF4y2Ba肠球菌cecorum。gydF4y2Ba在目前的研究中，从健康鸡群中分离出盲肠分离株(来自6个鸡群的12株)，而从BCO暴发的肉鸡中分离出盲肠、结肠、心包、胸椎尾椎、髋股骨关节、膝关节和跗关节(飞节)分离出的分离株(来自10个鸡群的111株)。采用脉冲场凝胶电泳法测定样品的相似性。克隆gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba从同一群动物的不同骨骼/关节和心包膜中分离出种群，肠道菌株携带相同的脉冲型，表明该细菌起源于肠道。健康禽群肠道分离株聚集在远离BCO菌株的地方。从患病动物的肠道、骨/关节和心包膜分离物中分离出的一组基因在健康动物的肠道分离物中不存在，例如编码肠球菌多糖抗原的基因(gydF4y2Ba环境保护署gydF4y2Ba基因)，细胞壁结构成分和营养转运体。在胚胎死亡率模型中，与来自健康鸟类肠道的分离株相比，来自受感染鸟类的分离株的死亡率要高得多，这表明毒性增加。gydF4y2Ba

家禽业为不断增长的人口提供了负担得起的高质量蛋白质来源。为了满足对动物源性蛋白质日益增长的需求，几十年的遗传选择创造了能够消耗大量饲料并将其高效转化为肉的肉鸡。然而，缺点是禽鸟更容易受到与高产能直接相关的代谢和传染病的影响，有时被归为生产疾病的总标题。考虑到体重的快速增加和骨骼的不成熟，不足为奇的是，过去二十年来最重要的生产疾病之一是细菌性软骨坏死伴骨髓炎(BCO)，通常表现为跛行，有时甚至无法行走[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。这种疾病是肉鸡致残的最常见原因之一[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba]，其特征是在反复机械应力下快速生长的骨骼中发生细菌感染，通常发生在胫骨、股骨和胸椎尾侧。术语常常令人混淆，如“驼背”(不正确)、脊柱炎、脊椎滑脱和股骨头坏死等名称被用来描述类似或相等的综合征[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。BCO一词指一种细菌感染，以区别于跛足的非感染性原因[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

BCO的发病机制尚不完全清楚，但假设细菌进入血液并血液扩散到骨软骨裂或生长板处的微骨折[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。当细菌在生长板上定植时，抗生素和宿主免疫系统很难接触到它们，这使得它们能够诱导坏死。gydF4y2Ba

引人注目的是，在BCO病变中发现的细菌大多是通过肠上皮易位并全身扩散的共生肠道细菌。这表明胃肠道健康与BCO之间有明确的联系，益生菌可以帮助预防BCO的观察结果也支持了这一点[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。从BCO病例中分离出的细菌属和种包括机会性细菌，包括葡萄球菌、gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba肠球菌。当葡萄球菌在上呼吸道和皮肤上定植时，gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba肠球菌是丰富的肠道细菌。在BCO病例中分离的特定细菌种类之一是gydF4y2Ba肠球菌cecorumgydF4y2Ba一种兼性厌氧革兰氏阳性细菌，常见于鸡肠道[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。隔离的gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba源自骨髓炎、脊柱炎和关节炎的病毒大多是克隆的，而来自健康鸡盲肠的分离株具有遗传多样性[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba，gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。脊柱炎在雄性肉鸡种鸡经静脉注射和口服注射后均有发生gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba从脊柱炎病例中分离出来，从而满足Koch的假设[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。然而，这些毒力因子在疾病发生和发展中的确切发病机制、性质和作用尚不清楚。gydF4y2Ba

基因组比较gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba从患病动物的病变中分离出的菌株与从健康动物中分离出的菌株已经进行了比较，并确定了每种类型中特异性存在的基因[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba，gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。虽然这产生了有用的信息，但尚不清楚哪些遗传因素导致了疾病。一些与生物膜生产和细胞表面多糖生产有关的基因被认为是重要的[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。此外，已经进行的研究使用了当地的分离株，因此尚不清楚是否可以在世界范围内找到相同类型的菌株。各种研究报告说，从病例中分离出来的菌株在接种受精卵后引起死亡的能力不同，尽管这似乎不是完全决定性的，因为已经描述了一些变异[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba，gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。据推测，这是由于在假定的致病菌株组中使用了非致病性菌株，因为在患病动物中分离了共生菌，而且胚胎死亡率测定可能不是菌株诱导BCO能力的最佳指标[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。到目前为止，文献中的一个主要问题是胚胎死亡率测定没有描述菌株的遗传背景，而是使用分离源来比较毒力潜力。gydF4y2Ba

因此，我们研究的目的是确定比利时之间是否存在类似的遗传差异，如美国菌株所描述的那样gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba与健康肉鸡的菌株相比，从BCO病例中分离出的菌株，使用PCR检测假设的毒力基因子集。此外，我们还提供了致病菌株和非致病菌株诱导的胚胎死亡之间的非致病联系，其中存在毒力基因。gydF4y2Ba

细菌分离培养gydF4y2Ba

在2019-2020年期间，从比利时16个不同的肉鸡养殖场(10个BCO爆发养殖场和6个无疾病养殖场)收集样本。样本包括疑似感染的鸡的骨和关节病变(胸椎尾椎、髋-股关节、膝关节、飞关节)、心包、盲肠和结肠(从回肠-盲肠连接处到泄殖腔)内容物的拭子gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba感染基于临床病史和尸检结果。来自6个不同农场的临床健康鸟类的盲肠拭子，无临床症状或尸检结果gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba，也被收集。用粘菌素(10mg /L)、萘啶酸(10mg /L)和5%羊血(CNA)接种于哥伦比亚琼脂上。培养皿在37℃，5% CO下孵育过夜gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba的气氛。每个平板纯化1 - 3个小的、灰色的、非溶血或轻微α-溶血菌落。分离物采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)进行鉴定。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba，gydF4y2Ba22gydF4y2Ba，gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。所有分离株保存在- 80℃，培养基中含有7.5%葡萄糖，50 mL BHI, 150 mL马血清。gydF4y2Ba

脉冲场凝胶电泳gydF4y2Ba

所有分离株(gydF4y2BangydF4y2Ba= 123)，按照Luey等人描述的方案通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)聚类。[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]和Borst等人。[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。简单地说,收集gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba将隔夜血板上的菌落重悬于TE缓冲液中，并调整至ODgydF4y2Ba_600gydF4y2Ba1.5。mutanolyysis (0.4 U/μL;Sigma)和溶菌酶(0.94 mg/mL;37°C孵育10分钟前加入蛋白酶K (0.33 mg/mL;加入默克生命科学公司(Merck Life Science)，然后加入等体积熔化的1.2% SeaKem®Gold琼脂糖(龙沙)，然后装入塞模。室温凝固后，琼脂糖塞浸入含有蛋白酶K (0.5 mg/mL)的ES缓冲液中，在55℃下持续剧烈摇动1 h。然后在50°C的无菌超纯水中洗涤2次，洗涤10分钟，然后用TE缓冲液洗涤4次，之后在TE缓冲液中保持4°C。将桥塞切片，并在Tango限制性缓冲液(Thermo Fisher Scientific)中在室温下平衡10分钟。然后将切片用酶在新鲜的限制性缓冲液中消化gydF4y2BaSmagydF4y2BaI (40u;电泳于1% SeaKem®Gold琼脂糖和0.5 ×三硼酸edta (TBE)缓冲液中，在6 V下进行21小时，脉冲时间为5-30秒，在14°C下进行。gydF4y2Ba沙门氏菌血清gydF4y2Ba血清型brenderup H9812，用gydF4y2BaXbagydF4y2BaI (100u;以赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)为标准。经溴化乙啶染色和超纯水去染后，所得凝胶的紫外照射图像被数字记录。数字化图像的分析由软件BioNumerics (version 7;应用数学，圣马丁拉丁，比利时)。采用1.0%位置公差和1.0%优化的Dice和Ward聚类方法计算相似度。只有指纹相似度达到95%以上的分离株才被认为属于同一脉型[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。无法区分的PFGE类型被视觉证实。gydF4y2Ba

PCR扩增gydF4y2Ba

采用聚合酶链反应(PCR)测定了18种推定的毒力因子的存在gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba，根据Borst等人的说法。[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。44gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba根据PFGE结果获得不同脉冲型的菌株，在血琼脂平板上培养过夜。将单个菌落加入20 μL裂解缓冲液(10% SDS, 1 M NaOH)中，加入180 μL HPLC水，95℃加热5 min，提取DNA。然后将DNA样本在16000离心gydF4y2BaggydF4y2BaPCR反应混合物中含有5 μL Polymerase Taq platinum (BioMix™Meridian Bioscience Inc.， USA)，每种引物0.25 μL (20 μM)， 1 μL DNA和最高10 μL的HPLC水。PCR扩增方法如下:95°C, 5 min;35次循环，95°C 30秒，55°C 30秒，72°C 1分钟;72°C, 10分钟。PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳。表格gydF4y2Ba1gydF4y2Ba显示目标基因和引物序列。使用R(4.2.0版)中的pHeatmap包创建了PCR结果的热图。gydF4y2Ba

胚胎死亡率测定gydF4y2Ba

试验共使用525只肉鸡受精卵(比利时Vervaeke孵化场)。鸡蛋在37.5°C和45%的相对湿度下孵育。孵育第10天，选择20个卵接种gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba从健康禽群(5)和爆发禽群(10)的动物中分离出膝关节、胸椎尾椎(5)和盲肠病变。这20株菌株来自不同的脉冲型和不同的毒力基因百分比。应变选择显示在附加文件中gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。在这里,gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba菌株在BHI肉汤中37℃培养24 h，然后用无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)重悬。然后将悬浮液在4℃下保存18 ~ 24 h。通过在BHI琼脂板上稀释10倍来测定细菌数量。gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba用无菌PBS稀释至5 × 10gydF4y2Ba^4gydF4y2BaCFU /毫升。接种前用蜡烛法确认卵的育性，去除不育卵和质量差的胚胎。所有胚胎的气室都被标记，并用Lugol 's碘溶液(Sigma)消毒外壳区域。为每一个gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba以200 μL/卵接种5个孵育10 d的卵gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba悬浮液(1 × 10gydF4y2Ba^4gydF4y2Ba尿囊腔CFU)。孵育10 d的对照卵，接种200 μL/个无菌PBS于尿囊腔内。将接种后的卵孵育7天，每24小时进行一次烛光照射，评估死亡率。为了确定胚胎死亡率测定的最佳剂量，我们首先注射gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba菌株3、89、102和123稀释系列(10gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba菌落;10gydF4y2Ba^4gydF4y2Ba菌落;10gydF4y2Ba^6gydF4y2BaCFUs)在卵尿囊腔的无菌PBS中。实验采用5个生物重复。统计分析采用GraphPad Prism 9中的学生t检验。gydF4y2Ba

隔离gydF4y2Ba肠球菌cecorumgydF4y2Ba菌株gydF4y2Ba

对心包、胸椎尾椎、髋股关节、膝关节、飞关节共76例标本进行分析。心包标本检出率为57%(13/23)，髋股关节标本检出率为64%(7/11)，尾椎标本检出率为92%(11/12)，膝关节标本检出率为79%(19/24)，飞节标本检出率为100% (6/6)gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba隔离。对暴发动物的58份盲肠标本和5份结肠标本进行了分析，其中90%(52/58)的盲肠标本和60%(3/5)的结肠标本被检出gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba隔离。80%(111/139)的BCO样本呈阳性gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba骨/关节和心包膜阳性74% (56/76)，caeca和结肠阳性87%(55/63)。来自6个农场的动物的盲肠样本中，63%(12/19)没有BCO的临床问题gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba隔离。描述的特征的123gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba如附加文件所示gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

脉冲场凝胶电泳gydF4y2Ba

对所有123株分离物进行PFGE以确定相似性(分离物118、119和122没有PFGE谱;数字gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。根据95%的描述水平，分离物可分为16个脉冲型和27个独特的模式。克隆gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba从同一受感染农场内的不同动物和骨骼/关节和心包膜中分离出种群，其中肠道菌株携带相同的脉冲型，指出了系统性存在的细菌的肠道起源(图2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。来自未受感染农场的肉鸡肠道的分离株聚集在与疾病相关的PFGE集群之外。gydF4y2Ba

基于pcr的潜在毒力相关基因检测gydF4y2Ba

根据PFGE结果，共筛选出36株爆发菌株(胸椎3株、心包2株、膝关节8株、飞关节2株、盲肠20株、结肠1株)和8株来自非病禽盲肠的爆发菌株。这些来源于不同的脉冲类型和独特的模式，并从不同农场的不同鸟类和骨骼/关节和心包中分离出来(图2)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。在15个国家中gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba从骨头/关节和心包膜分离的爆发菌株中，14株含有67-100%的分析潜在毒力基因，而1株含有11%的分析潜在毒力基因。从疫情中分离出的21株caeca/结肠分离株中，11株含有78-100%的潜在毒力基因，10株含有6-22%的潜在毒力基因。另一方面，从未感染鸡群的肉鸡的caeca中分离出的8株菌株均含有0-11%的潜在毒力基因(图2)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。此外，从病鸡的肠道、骨/关节和心包中分离出来的分离物含有一组健康动物肠道分离物中不存在的基因，包括编码肠球菌多糖抗原(gydF4y2BaepaPgydF4y2Ba-like基因，ECS3_2299)，细胞壁结构组分和营养转运蛋白(表3)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

胚胎死亡率测定gydF4y2Ba

根据最优剂量试验，其中gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba389株和102株为爆发株gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba123是从健康动物中分离出来的菌株，10gydF4y2Ba^4gydF4y2Ba接种剂量选择CFU。注入gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba3和gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba89 / 10gydF4y2Ba^4gydF4y2BaCFU和10gydF4y2Ba^6gydF4y2BaCFU导致胚胎死亡率为80%到100%。因此，我们评估了20株菌株在10℃时的胚胎死亡率gydF4y2Ba^4gydF4y2Ba用于胚胎死亡率测定的菌株列表，见附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。接种来自膝关节/胸椎、盲肠的爆发菌株和来自健康肉鸡的菌株，肉鸡胚胎的总死亡率分别为20% ~ 56%、12% ~ 64%和4% ~ 8%。骨骼病变菌株的平均死亡率为40%(图2)gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba暴发菌株和从健康动物中分离的菌株的平均死亡率分别为36.8%和5.6%(图2)gydF4y2Ba3.gydF4y2BaB)。在胚胎致死试验中，与健康禽类肠道分离株相比，来自受感染禽类的分离株的平均死亡率显著较高(gydF4y2BapgydF4y2Ba-value = 0.0001)。死亡主要发生在接种后第2天和第3天。我们没有发现菌株的胚胎致死率与菌株编码的潜在毒力基因百分比之间存在相关性(图2)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

自2002年以来，关节和骨病的爆发与gydF4y2Bae . cecorumgydF4y2Ba导致肉鸡跛行，在世界上许多国家都有越来越多的报道[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba，gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。例如，最近的一项研究表明，在法国，gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba占2006年报告的所有家禽病原体的0.4%，到2020年将增长到12.9% [gydF4y2Ba29gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba肠球菌cecorumgydF4y2Ba主要与运动障碍和败血症有关[gydF4y2Ba29gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

我们的数据显示克隆gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba在疫情爆发农场的多个动物中存在种群，表明存在在动物之间传播的特定致病菌株。使用PFGE，我们证实致病菌株聚集在一起，并进入不同的集群与共生菌株相比。这与其他显示农场特异性克隆谱系的研究一致[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

我们的数据显示克隆分离株来源于骨/关节和心包膜，但也来源于个体动物的肠道，这表明存在于心包和骨/关节中的菌株来源于肠道。在家禽中，肠道屏障的渗漏被认为经常发生，要么是由病原体引起的(gydF4y2Ba艾美球虫属gydF4y2Ba，gydF4y2Baperfringens梭状芽胞杆菌gydF4y2Ba(肠内病毒，如腺病毒和呼肠孤病毒)或由饲料来源的分子(包括霉菌毒素)[gydF4y2Ba31gydF4y2Ba]。这可能会使肠道细菌转移到血液中。为什么细菌种类中的特定细菌病原体或菌株可以易位，在宿主的免疫防御中存活，并定植在骨骼/关节和心包膜上，迄今尚不清楚。gydF4y2Ba

根据假设毒力基因的pcr谱分析，比利时暴发的分离株具有与美国致病克隆细菌种群相似的遗传谱。先前的一项研究基于比较基因组学确定了美国致病菌株的特定基因组区域和基因，这可能与毒力有关[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。我们的研究证实了这些观察结果，因为在我们的研究中，从健康动物分离的菌株中检测到的推定毒力因子平均为6.3%，而从患病动物的盲肠/结肠、骨骼/关节和心包分离的致病菌株中分别检测到56%、75%和100%。这些致病性相关基因的功能尚未被研究，并不是所有这些基因都可能在毒力中起作用，而可能仅仅是不同染色体背景的结果。然而，一些特定于病原体的基因可能起作用，比如gydF4y2Ba环境保护署gydF4y2Ba编码肠球菌多糖抗原的基因簇。的gydF4y2Ba环境保护署gydF4y2Ba基因簇在病毒毒力、生物膜形成和对多形核白细胞杀伤的抗性中起重要作用gydF4y2Ba粪大肠gydF4y2Ba(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba，gydF4y2Ba33gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。接下来的步骤应该集中在证明科赫的假设上，通过去除感兴趣的基因和显示毒性的丧失。gydF4y2Ba

定义良好的大集合gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba在本研究中使用的分离株在胚胎致死试验中允许病原株和共生株之间的明确分离。与共生菌株相比，致病菌株确实具有毒力属性，使它们能够导致更高的胚胎死亡率(36.8%对5.6%)。以前的研究也表明由爆发菌株引起的死亡率更高，但观察到的差异不太明显[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]，可能与使用健康动物的肠道分离物有关，这是致病的。我们确实使用了分离株的来源和基于聚合酶链反应(pcr)的特定基因检测，这些基因被分配给毒性菌株，以对菌株进行毒性分类。因此，胚胎死亡率模型可用于确定特定潜在毒力基因在BCO中的作用，尽管目前尚不完全清楚胚胎死亡率本身是否是BCO致病能力的可靠指标[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

结果表明gydF4y2Ba大肠cecorumgydF4y2Ba可在BCO暴发时从骨骼/关节和心包膜中分离出来，也可在肠道中分离出来，这表明菌株起源于肠道。比利时爆发菌株与美国爆发菌株具有相同的遗传背景，与共生菌株相比，在胚胎死亡率模型中毒性更强。今后的步骤应着眼于确定毒力属性，以便制定有针对性的控制措施。gydF4y2Ba

本研究中使用和/或分析的数据集可根据通讯作者的合理要求提供。gydF4y2Ba

我们感谢Johan Van Erum(比利时Galluvet NV)和Katrien Rysman(比利时根特大学)对鸡群进行取样。我们要感谢Chana Callens, Serge veranck(比利时根特大学)和Sjarlotte Willems(比利时弗拉德伦ILVO)的技术支持。gydF4y2Ba

这项工作得到了中国国家留学基金委的资助。gydF4y2Ba

作者及单位gydF4y2Ba

1. 根特大学兽医学院病理生物学、药理学和动物医学系，家畜肠道健康小组(光)，索尔兹伯里兰133,9820，比利时梅尔贝克gydF4y2Ba

   黄悦、Venessa Eeckhaut、Evy Goossens、Richard Ducatelle、Gunther Antonissen和philip Van ImmerseelgydF4y2Ba

2. 法兰德斯农业、渔业和食品研究所(ILVO)-技术和食品科学部，1990年，比利时梅勒gydF4y2Ba

   Geertrui RasschaertgydF4y2Ba

3. Galluvet, dwarstrat 3, 3560, Lummen，比利时gydF4y2Ba

   Johan Van Erum & Geert roversgydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

EG、VE、RD、GA和FVI设计试验。除了PFGE分析由GR完成外，YH完成了所有的实验工作gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba。负担,GRgydF4y2Ba^3.gydF4y2Ba从禽群中分离出菌株。YH写了手稿。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Baphilip Van ImmerseelgydF4y2Ba。gydF4y2Ba

伦理批准并同意参与gydF4y2Ba

本研究在商业农场进行。住房和动物护理符合欧盟指令2007/43/EC和委员会向欧洲议会和理事会提交的关于本指令应用的报告。禽类仅为取样而实施安乐死，该程序按照2009年9月24日理事会条例(EC) No 1099/2009附件1进行。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者宣称他们没有竞争利益。gydF4y2Ba

执行编辑:马塞洛·戈特沙尔克gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

伟德体育在线施普林格·自然对已出版的地图和机构关系中的管辖权要求保持中立。gydF4y2Ba

开放获取gydF4y2Ba本文遵循知识共享署名4.0国际许可协议，该协议允许以任何媒介或格式使用、共享、改编、分发和复制，只要您适当地注明原作者和来源，提供知识共享许可协议的链接，并注明是否进行了更改。本文中的图像或其他第三方材料包含在文章的知识共享许可协议中，除非在材料的署名中另有说明。如果材料未包含在文章的知识共享许可中，并且您的预期用途不被法律法规允许或超过允许的用途，您将需要直接获得版权所有者的许可。如欲查阅本许可证副本，请浏览gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba。创作共用公共领域免责声明(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba)适用于本文中提供的数据，除非在数据的信用额度中另有说明。gydF4y2Ba

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