一种富含多酚的制剂通过癌症干细胞和炎症通路调节对乳腺癌的化学预防作用gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

据报道，水果中天然存在的多酚化合物，特别是蓝莓，在癌症化学预防和化疗中有显著作用。蓝莓汁的生物转化gydF4y2Ba沙雷氏菌属vacciniigydF4y2Ba增加其多酚含量并赋予其抗炎特性。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

本研究评估了富含多酚的蓝莓制剂(PEBP)及其非发酵的蓝莓制剂(NBJ)在体外、体内和体外环境中对乳腺癌干细胞(CSC)发育的影响。在三种细胞系(小鼠4T1和人MCF7和MDA-MB-231)体外测量了PEBP对细胞增殖、移动性、侵袭和乳腺球形成的影响。在BALB/c小鼠模型中进行体外乳腺球形成、肿瘤生长和转移观察。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

我们的研究发现，PEBP影响乳腺CSC的细胞信号级联，调节转录因子的活性，从而通过减少转移和控制PI3K/AKT、MAPK/ERK和STAT3通路(CSC炎症信号的中心节点)来抑制体内肿瘤的生长。PEBP显著抑制4T1、MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖。在所有细胞系中，PEBP减少了乳腺球的形成、细胞流动性和细胞迁移。在体内，PEBP显著降低了肿瘤的发展，抑制了离体乳腺球的形成，并显著减少了肺转移。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

这项研究表明，通过发酵富集蓝莓制剂的多酚，通过保护小鼠免受肿瘤发展，抑制癌症干细胞的形成和减少肺转移，增加了其化学预防潜力。因此，PEBP可能是一种新的补充替代医学疗法和新型乳腺癌治疗剂的来源。gydF4y2Ba

生活方式的改变显著有助于癌症预防，并被认为是转化医学的重要范式[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba］．例如，一项饮食干预表明，遵循地中海饮食几个月就足以改善乳腺癌幸存者的代谢/内分泌特征[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba］．事实上，乳腺癌患者是结合传统肿瘤护理的中西医结合疗法的最高使用者之一[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．目前，癌症预防植物化学物质因其对癌症干细胞(CSC)自我更新途径的影响而受到越来越多的关注[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba］．与这些报道一致，我们的初步结果表明，发酵蓝莓制剂(称为多酚富集蓝莓制剂(以下简称PEBP))对乳腺CSCs的抑制支持饮食介导的CSCs靶向作用。蓝莓多酚对乳腺癌的化学预防作用是众所周知的[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba］．例如，欧洲蓝莓的酚提取物被证明可以抑制乳腺癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba］．因此，增加蓝莓中酚类物质的含量可以增强其抗癌特性，降低其转移潜力。事实上，用一种从蓝莓菌群中分离出来的新型细菌对蓝莓汁进行生物转化，可以增加其酚含量和抗氧化活性[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

CSCs是一种高度致瘤性细胞亚型，正在成为癌症的关键驱动因素[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba10gydF4y2Ba］．乳腺癌中的CSCs已被鉴定为CD44gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba/ CD24gydF4y2Ba^低gydF4y2Ba表型和能够生长为球体，在这种情况下，称为乳腺球[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12gydF4y2Ba］．白介素6 (IL-6)及其主要效应物信号换能器和转录激活因子3 (STAT3)是恶性肿瘤炎症相关途径的重要组成部分，并高度参与CSC的发展和进展[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．STAT3最近被认为是减少肿瘤生长的关键治疗靶点[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]和转移[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]在不同类型的癌症中据报道，在CSCs中观察到的持续自我更新受IL-6/STAT3/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路的表观遗传控制[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba］．STAT3和PTEN是正反馈循环的一部分，它是炎症和癌症之间的表观遗传开关的基础。因此，预防或抑制PI3K/STAT3/PTEN信号通路的放松可能有利于乳腺癌的治疗和更好的结果。几种信号转导途径，如细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(Erk/MAP)途径和PI3K途径已与乳腺癌发生有关[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

此外，丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的成员在控制细胞对环境的反应以及调节癌症中的基因表达、细胞生长和凋亡方面的作用已得到充分研究[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba］．细胞外信号调节激酶(ERKs)-1/2与细胞增殖和存活有关，而应激激活的MAPKs, p38和c-Jun n端激酶(JNK)与细胞凋亡有关[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．控制MAPK通路被证明影响CSC-promoting il - 6和修改CSC-like行为gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

不同的研究表明，PEBP的发酵大大提高了其抗氧化潜力[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]并赋予其新型消炎作用[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]，抗糖尿病药[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba，gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]及其他生物活动[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba］．重要的是，PEBP的抗炎作用似乎与IL-6相关途径有关，这可以通过降低高血糖、激活AMPK途径和模拟二甲双胍代谢作用来证明[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．此外，我们的研究显示PEBP增加脂联素分泌[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]，可能是通过抵消活性氧[gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]和抑制促炎细胞因子[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba];导致炎症反应的两种机制。事实上，炎症与肥胖、糖尿病和癌症有关。gydF4y2Ba28gydF4y2Ba］．本研究的目的是研究富含多酚的蓝莓制剂(PEBP)在细胞模型和体内对乳腺癌干细胞发育的抗癌作用，以及STAT3和MAPKs信号通路在其化学预防活性中的参与。gydF4y2Ba

蓝莓汁的制备gydF4y2Ba

成熟低丛蓝莓(gydF4y2BaVaccinium angustifoliumgydF4y2BaAit.)是从樱桃田食品公司(樱桃田，ME)购买的新鲜和未经处理的水果。蓝莓汁通过混合水果(100克)在博朗4259型食品加工机中提取。然后将水果混合物以500倍离心gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟，去除不溶性颗粒。使用0.22 μ m Express Millipore过滤器(Millipore，怡烟焦，ON)对产生的果汁进行消毒。gydF4y2Ba

沙雷氏菌属vacciniigydF4y2Ba细菌按先前所述的方法培养[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．蓝莓和富含多酚的蓝莓制剂在其他地方也有部分特征[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba29gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

细胞培养gydF4y2Ba

6-硫鸟嘌呤耐药细胞系小鼠4T1、人MCF-7和人MDA-MB-231细胞系从American Type cell Collection (ATCC;芝加哥，伊利诺伊州，美国)。ATCC通过短串联重复谱验证了人类细胞系，通过细胞色素C氧化酶1基因测定证实小鼠细胞系来自小鼠。MCF-7细胞培养于MEM, 4T1和MDA-MB-231, rmi -1640，含有FBS (10%， v/v) (ATCC)，青霉素(100µU/ml)，链霉素(100µg/ml) (Sigma-Aldrich, Oakville, ON)的培养基中，37℃，5% CO的潮湿气氛中gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

细胞生存能力gydF4y2Ba

细胞活力通过水溶性四唑盐(WST-1)和乳酸脱氢酶(LDH)测定(Roche, Laval, QC)进行评估。处理24小时后，按照制造商的说明收集上清液进行乳酸脱氢酶测定。用μ-Quant平板阅读器(Bio-Tek, Winooski, VT)测量吸光度[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

细胞活性gydF4y2Ba

细胞以1 × 10的密度镀于六孔板中gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba细胞/0.2 ml/孔，形成融合的单分子膜24小时。然后用移液管尖划伤单层，用rmii -1640清洗去除漂浮细胞，拍照(时间0)。用NBJ或PEBP处理细胞24小时。然后在每孔随机选择的3个位置再次拍照。与时间0相比，细胞运动性表示为迁移细胞覆盖表面积的百分比[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

细胞入侵gydF4y2Ba

细胞侵袭实验是在组织培养(TC)插入物(BD biosciences, Mississauga, on)的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜(孔径8微米)上按照制造商说明进行的。简而言之，细胞在上面的培养室中培养24小时。然后将插入物转移到含有HBSS并添加4µg/ml Calcein AM的新板上1小时。测量荧光强度，并表示为未处理的对照孔的比率[gydF4y2Ba31gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

Mammospheres形成gydF4y2Ba

用胰蛋白酶分离粘附细胞，用伯爵夫人自动细胞计数器(Invitrogen, Burlington, ON)计数单细胞。对于肿瘤组织，每个肿瘤约0.05 g被切碎，并在含有300 U/ml胶原酶(Sigma)和100 U/ml透明质酸酶(Sigma)的rmi -1640培养基中分离，在37℃下分离2小时。细胞通过100µm和40µm细胞过滤器(BD Biosciences)依次筛分，以获得单细胞悬液，并在血细胞计中计数。gydF4y2Ba

单细胞在10℃低温附在96孔板(Costar)上gydF4y2Ba^3.gydF4y2Ba细胞/0.2 ml/孔，在存在/不存在PEBP和NBJ的情况下，在DMEM-F12 (Invitrogen)中，补充10 ng/ml EGF, 20 ng/ml bFGF, 5µg/ml胰岛素，1 mM丙酮酸钠，0.5µg/ml氢化可的松，青霉素/链霉素(0.05 mg/ml) (Sigma) [gydF4y2Ba16gydF4y2Ba］．4-7天后计数在这些条件下生长的非粘附球形细胞团或乳腺球。gydF4y2Ba

il - 6的决心gydF4y2Ba

BD OptEIA小鼠IL-6 ELISA试剂盒(BD Biosciences)按照制造商的说明使用乳腺球测量细胞外IL-6的产生。gydF4y2Ba

Western blot分析gydF4y2Ba

在有/没有PEBP和NBJ处理1、2、6和24 h后，收集乳腺球形成条件下的细胞并裂解。细胞裂解物在10%丙烯酰胺凝胶上运行，转移到PVDF膜上，并用抗磷酸化的STAT3(1:1000)、PI3K(1:1000)、Akt(1:1000)、PTEN(1:1000)、p38 MAPK(1:1000)、ERK1/2(1:1000)、SAPK/JNK(1:1000)、β-肌动蛋白(1:1000)进行检测(Cell Signaling Tech. Inc.， Danvers, MA, USA)。利用辣根过氧化物酶偶联二抗体通过化学发光观察条带。使用Bio-Rad Quantity One软件(Bio-Rad, Mississauga, ON)，以β-肌动蛋白作为负荷控制，定量条带。gydF4y2Ba

动物gydF4y2Ba

6 - 8周龄、体重18-20克的BALB/c雌性小鼠(Charles River, Montreal, QC)随机分为7个实验组:对照组、NBJ 12.5%、NBJ 25%、NBJ 50%、PEBP 12.5%、PEBP 25%和PEBP 50%。每个实验组由8只小鼠组成，小鼠被安置在受控环境中(温度22±2°C;湿度55±2%)，光照/黑暗循环12小时。小鼠按照加拿大动物护理委员会的指导方针进行饲养和治疗。该议定书(ME-289)得到了渥太华大学动物保护委员会的批准。gydF4y2Ba

对照组小鼠喝的是正常水，NBJ-组和PEBP-组小鼠喝的是NBJ或PEBP，分别以12.5、25和50% (v/v)的浓度加入饮用水。治疗2周后，所有小鼠腹腔乳腺脂肪垫皮下注射4T1细胞(1400个/0.1 ml/只)。接种3周后，取肿瘤及肺称重[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba］．老鼠平均每天喝2.9毫升蓝莓汁，两种蓝莓汁都有很好的耐受性，而且不影响老鼠的体重。gydF4y2Ba

肺转移gydF4y2Ba

将肺切碎，在含有300 U/ml胶原酶(Sigma)的rmi -1640培养基中分离，37°C 15分钟。通过40µm细胞过滤器(BD Biosciences)过滤后，收集细胞并悬浮在含有10%胎牛血清(ATCC)、青霉素/链霉素(0.05 mg/ml)和60 μM 6-硫鸟嘌呤(Sigma)的rmi -1640中。细胞被镀于10厘米的培养皿(康宁)，37°C, 5% CO的潮湿气氛中gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba．14天后，用甲醇固定肺细胞，0.03%亚甲基蓝染色。计数所有蓝色菌落，一个菌落代表一个克隆性转移细胞[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

使用GraphPad Prism软件5.04版(San Diego, CA, USA)对数据进行ANOVA统计分析和Bonferroni事后检验。p≤0.05为差异有统计学意义。数据以均数±SEM报告。gydF4y2Ba

抑制乳腺癌细胞增殖gydF4y2Ba

在200 μM GAE浓度下，PEBP对4T1、MDA-MB-231和MCF-7癌细胞的增殖抑制率分别为34%、24%和33%(图2)。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)，而相同浓度的NBJ对4T1细胞增殖的抑制作用仅为32%(图2)。gydF4y2Ba1gydF4y2Baa).在MDA-MB-231和MCF7中未观察到NBJ的显著影响(图。gydF4y2Ba1gydF4y2Bab, c).根据LDH测定(数据未显示)，PEBP和NBJ在测试浓度下对三种细胞系均无任何毒性。gydF4y2Ba

运动能力和侵袭潜能降低gydF4y2Ba

NBJ和PEBP在150 μM没食子酸当量(GAE)下均显著降低了4T1和MDA-MB-231的侵袭能力(图2)。gydF4y2Ba2gydF4y2Bad, e)。然而，只有PEBP对所有三种乳腺癌细胞系的运动性表现出抑制作用(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Baa - c)。与对照组相比，NBJ对细胞活力无显著影响。gydF4y2Ba

抑制乳腺球形成gydF4y2Ba

PEBP显著减少了三种细胞系中乳腺球的形成。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba)，在150 μM时，PEBP几乎完全被抑制。用相同浓度的NBJ处理仅对MDA-MB-231表现出75%的抑制作用。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bab)，而在4T1中，它显著增加了60%的乳腺球的形成(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba一个)。gydF4y2Ba

抑制IL-6/STAT3/PI3K信号通路gydF4y2Ba

在乳腺球形成条件下，6h nj处理显著提高了所有三种细胞系中IL-6的分泌(图2)。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bad-f)，而与对照细胞相比，PEBP没有诱导任何修饰。gydF4y2Ba

此外，PEBP显著抑制了三种细胞系中STAT3和PI3K/Akt的磷酸化。这种抑制在6 h处理后开始(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Baa-i)并持续24小时(数据未显示)，而NBJ仅降低了PI3K的磷酸化。PEBP和NBJ均显著增强了4T1中PTEN的活性(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Baj)，但只有PEBP增加了MDA-MB-231和MCF-7中PTEN的磷酸化(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bak-l)。gydF4y2Ba

MAPKs通路的改变gydF4y2Ba

从加入PEBP后1小时开始，在4T1和MCF-7中观察到ERK1/2磷酸化的显著抑制(图2)。gydF4y2Ba5gydF4y2Baa, c). PEBP还增加了所有三个细胞系的MAPK p38和JNK/SAPK磷酸化。它们的抑制或激活状态在治疗2小时后达到最大水平，并保持稳定至24小时(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bad - i)。NBJ未显示3个MAPKs家族成员有任何显著的改变。gydF4y2Ba

减少体内肿瘤生长、乳腺球形成和转移gydF4y2Ba

如图所示。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba当长期给药超过5周时，NBJ以剂量依赖的方式减少肿瘤体积和重量。然而，仅在NBJ 50%组观察到显著作用，而所有三剂量pebp处理的小鼠均表现出明显的肿瘤生长延迟(图2)。gydF4y2Ba6gydF4y2Baa, b)。此外，仅在PEBP治疗50%的动物的肿瘤中，肿瘤原代细胞的乳腺球形成显著减少(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bac).同样地，PEBP治疗显著减少了PEBP治疗小鼠的肺部转移，而与对照组相比，所有其他组均未表现出显著差异(图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bad)。gydF4y2Ba

化学预防是肿瘤整合和转化医学的重要组成部分。自然存在的化合物，如水果中的多酚，越来越多地认识到它们在控制CSCs中的异常信号通路和炎症信号方面的作用。我们小组发现，发酵后的益生菌样产品PEBP极大地增强了其抗氧化潜力，并赋予其新型抗炎功能[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]，抗糖尿病药[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba，gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]和神经保护[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]生物特性。强调PEPB多种有益作用的共同机制可能与其调节与细胞转化和炎症相关的全球调节因子活性的能力有关。此外，包括发酵和分解代谢分解在内的生物转化已被认为可提高生物利用度[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

事实上，研究发现PEBP可以抑制脂肪生成，增加肌肉细胞和脂肪细胞的葡萄糖摄取[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]通过激活amp活化激酶，模仿二甲双胍的活性[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba］．特别是，PEBP的抗炎作用指出了STAT3通路的阻断(CSCs和炎症所必需的)和AMPK的激活，这反过来又抑制了MAPK下游(糖尿病和癌症所必需的)。gydF4y2Ba

此外，PEBP通过抑制PI3K/AKT通路来模拟二甲双胍的抗炎/抗肿瘤活性。二甲双胍现在被认为是癌症的主要辅助治疗，对CSCs有强大的抑制作用[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba，gydF4y2Ba37gydF4y2Ba］．这一观察结果促使我们进一步研究PEBP对CSCs的影响。gydF4y2Ba

在200 μM GAE下，PEBP对三种乳腺癌细胞系均有抑制增殖作用，而NBJ在相同浓度下仅对4T1有抑制增殖作用。NBJ未如先前报道的那样显示MDA-MB-231有任何抗增殖作用[gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba］．这可能是由于在我们的研究中测试的剂量低。此外，PEBP显著抑制了所有三种癌细胞系的运动性，这促使人们进一步研究其体内抗转移活性。正如预期的那样，当在小鼠乳腺癌模型中进行测试时，PEBP显著降低了肺转移潜力。gydF4y2Ba

现在有大量证据表明，包括乳腺癌在内的许多癌症都是由一种细胞亚群驱动的，这种亚群被确定为癌症干细胞，它介导肿瘤转移和对常规疗法的耐药性。因此，控制CSC在乳腺癌中的生长是预防肿瘤发展和转移的可能途径。因此，研究pebp介导CSC生长的分子机制对于阐明其抗癌和抗转移活性非常重要。事实上，我们的数据表明，PEBP在体外显著抑制乳腺球的形成。此外，通过减少pebp处理动物的离体乳腺球发育，进一步证实了其抑制作用。gydF4y2Ba

多酚天然具有多靶点作用/机制，这解释了其广泛的生物活性[gydF4y2Ba40gydF4y2Ba］．它们的抗炎特性是炎症与瘤变界面的关键因素[gydF4y2Ba41gydF4y2Ba］．据报道，在癌症和炎症的交叉路口，STAT3和MAPK通路对CSC生长及其转移过程中获得的EMT特征至关重要[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba，gydF4y2Ba42gydF4y2Ba］．根据细胞类型，IL-6/ stat3依赖通路，如JAK/STAT [gydF4y2Ba13gydF4y2Ba， pi3k / akt / nf -κb [gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]，或p38 MAPK [gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]，可促进肿瘤生长，增强化疗的耐药性[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．因此，我们的研究旨在研究这些通路在PEBP抗肿瘤活性中的作用。我们证明，与未发酵的对照组相比，PEBP处理后CSC培养物中IL-6的产生以及STAT3和PI3K的磷酸化均有所下降。虽然蓝莓中的多酚通过控制炎症细胞因子如IL-6，显示出对癌细胞的抑制活性[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]， IL-6在CSC细胞转化早期出现显著的双相增加[gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]，独立于STAT3的降低。STAT3信号通路是恶性肿瘤中一种重要的炎症相关通路，已被认为是减少肿瘤生长和转移的关键治疗靶点[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．几种信号转导通路如STAT3、PI3K/AKT/NF-κB级联、p38/MAPK/ERK或AMPK通路在癌症发展和化疗难耐的各个阶段的炎症介导反应中发挥重要作用[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba］．此外，PI3K通路的下游效应物包括Akt, Akt在许多癌症类型中过表达，并与肿瘤发生性增加有关[gydF4y2Ba47gydF4y2Ba，gydF4y2Ba48gydF4y2Ba］．我们的初步结果表明，PEBP通过调节IL-6/STAT3、PTEN/PI3K/AKT轴和MAPK信号通路中的ERK/p38，在不同类型的细胞培养和体内延迟CSC的形成，这些都是CSC信号和稳态的中心节点[gydF4y2Ba49gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)．我们已经证明STAT3、AKT和PI3K降低，PTEN(一种由p53上调的肿瘤抑制基因)以非细胞类型依赖的方式增加，ERK1/2在4T1和MCF7中显著被抑制(图2)。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)．在MAPK通路中，ERK1/2与乳腺癌最为相关。在肥胖相关的实验模型中，ERK1/2表达增加最近被报道为推动内分泌抵抗和乳腺癌进展[gydF4y2Ba50gydF4y2Ba］．事实上，PEBP和NBJ都能抑制PI3K的磷酸化。这些发现与之前的报道一致，将PI3K活性的抑制归因于蓝莓的抗癌作用[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba38gydF4y2Ba］．在我们的研究中，PEBP和NBJ还可能通过抑制miRNA-21的表达来增强PI3K上游抑制蛋白PTEN的活性[gydF4y2Ba51gydF4y2Ba］．这些改变在NBJ中没有发现，可能是由生物转化过程中产生的新化合物发挥作用，并在不同类型的受体上协同作用。gydF4y2Ba

PEBP处理迅速增加p38-MAPK-和JNK-磷酸化，在2小时时显著达到最高水平，并持续升高至24小时。PEBP以同样的动力学和细胞类型独立的方式降低ERK1/2磷酸化。MAPK家族酶的修饰可能有助于消除PEBP提供的干细胞生长。事实上，JNK和MAPKp38的长时间激活和/或ERK1/2的抑制会诱导大多数癌细胞系的凋亡[gydF4y2Ba52gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba55gydF4y2Ba］．PEBP修改MAPKs活性的机制尚不清楚。此外，pebp诱导的上游MAPK成员的改变可能会抑制下游STAT3/PI3K/Akt信号通路，这表明MAPK级联和STAT3通路之间存在广泛的交叉和相互作用。gydF4y2Ba

我们利用BALB/c小鼠4t1诱导的乳腺癌模型进一步证实了PEBP的体内抗癌和抗转移潜力。4T1肿瘤具有高度的致瘤性和侵袭性，与大多数肿瘤模型不同，它可以自发地从乳腺原发肿瘤转移到多个远处部位[gydF4y2Ba56gydF4y2Ba，gydF4y2Ba57gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

通过在饮用水中掺入PEBP，长期给药可显著减少肿瘤体积和肿瘤衍生的乳腺癌干细胞的发育。这种减少支持了pebp治疗动物肺部转移的低计数。特别是在低至12.5%的治疗剂量下，PEBP具有抗癌和抗转移作用，根据从动物到人体使用体表面积的剂量换算，相当于人类每天喝1.2杯果汁[gydF4y2Ba58gydF4y2Ba］．而相同剂量的NBJ则无显著作用。只有在50%的剂量下，NBJ才能显示出肿瘤大小和重量的减少，这代表了人类对蓝莓汁的大量消耗。这些结果与之前的研究结果一致，之前的研究报告称，用蓝莓提取物或整个果粉喂养小鼠对炎症有影响，并可以延缓肿瘤生长[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba59gydF4y2Ba］．然而，NBJ未能达到PEBP观察到的乳腺癌干细胞和转移的减少。尽管如此，与NBJ相比，PEBP的制备过程大大增加了总酚类化合物的含量，可以在低治疗剂量下阐明其有效性。此外，PEBP的新型抗转移潜力可能是由生物转化过程中NBJ到PEBP的酚组成的变化所解释的。事实上，蓝莓汁的生物转化不仅增加了其酚类物质的含量，而且还产生了新的化合物[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．一种有趣的可能性是，与NBJ成分相比，这些新化合物可能具有更强的抗癌和抗转移特性，可能有助于观察到的肿瘤大小和转移的减小。此外，生物转化过程可能破坏了长多酚链，这些多酚链被胃肠道吸收较差，增加了它们的生物利用度，并使PEBP具有高功能[gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

本研究结果表明，富含多酚的蓝莓制剂能有效地抑制小鼠肿瘤的生长和转移。我们已经证明，发酵蓝莓对乳腺癌干细胞(CSCs)的抑制支持饮食介导的CSCs靶向。我们提供的证据表明，PEBP通过与维持干性和转移相关的信号通路选择性地抑制CSCs中的炎症特征。其作用机制至少部分涉及MAPKs级联的改变和STAT3信号通路的抑制，涉及炎症通路。结果令人信服地表明，PEBP作为一种化学预防剂确实有很大的前景，并可能代表一种针对乳腺癌和转移的新型补充疗法。总之，营养对CSCs的前瞻性调节可能标志着在预防乳腺癌和进一步优化这一重大疾病的管理方面取得了重大进展。它是转化医学的一种重要方法，用于特定的综合治疗，可作为癌症患者的循证支持治疗。gydF4y2Ba

CSC:gydF4y2Ba

癌症干细胞gydF4y2Ba

兵:gydF4y2Ba

细胞外信号调节激酶gydF4y2Ba

il - 6:gydF4y2Ba

interleukine 6gydF4y2Ba

物:gydF4y2Ba

c-Jun n -末端激酶gydF4y2Ba

GAE:gydF4y2Ba

没食子酸当量gydF4y2Ba

MAPK:gydF4y2Ba

丝裂原活化蛋白激酶gydF4y2Ba

NBJ:gydF4y2Ba

普通蓝莓汁gydF4y2Ba

PEBP:gydF4y2Ba

富含多酚蓝莓制剂gydF4y2Ba

STAT3:gydF4y2Ba

信号换能器和转录激活子3gydF4y2Ba

TV制备了PEBP，进行了细胞培养实验和动物实验，并起草了手稿。JFM参与动物实验，肺转移和起草部分手稿。SR进行了western blot。MO, HHV和ZH对乳房球实验的设计做出了贡献，并对手稿进行了修改。CM起草了部分手稿，并为本研究的概念和设计做出了贡献。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

研究经费由加拿大卫生研究院(CIHR)提供。我们要感谢Jairo Duarte在动物处理方面的贡献。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

Matar博士和Vuong博士已经为这种细菌申请了专利gydF4y2Ba沙雷氏菌属vacciniigydF4y2Ba．其他作者宣称他们没有利益冲突。gydF4y2Ba

作者及隶属关系gydF4y2Ba

1. 加拿大安大略省渥太华市史密斯路451号罗杰金顿厅，K1H 8M5，渥太华大学健康科学学院营养科学项目gydF4y2Ba

   Tri Vuong, Sam Rahbar和Chantal MatargydF4y2Ba

2. 渥太华大学医学院细胞与分子医学，渥太华，加拿大gydF4y2Ba

   让锤gydF4y2Ba

3. 癌症中心，乔治亚摄政大学，奥古斯塔，GA，美国gydF4y2Ba

   玛丽亚OuzounovagydF4y2Ba

4. 国际癌症研究机构，法国里昂gydF4y2Ba

   Hector Hernandez-Vargas & Zdenko HerceggydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba尚塔尔彼此gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

开放获取gydF4y2Ba本文根据创作共用属性4.0国际许可协议(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba)，允许在任何媒介上不受限制地使用、分发和复制，前提是您对原作者和来源给予适当的赞扬，提供到创作共用许可证的链接，并注明是否进行了更改。创作共用公共领域奉献弃权书(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba)除另有说明外，适用于本条所提供的资料。gydF4y2Ba

转载及权限gydF4y2Ba