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辛伐他汀不能减轻杜氏肌营养不良小鼠模型的肌肉病理gydF4y2Ba

骨骼肌gydF4y2Ba体积gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，文章号:gydF4y2Ba21gydF4y2Ba（gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba）gydF4y2Ba引用本文gydF4y2Ba

摘要gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

杜氏肌营养不良症(DMD)是一种不可治愈的疾病，由基因突变引起gydF4y2BaDMDgydF4y2Ba基因，编码肌萎缩蛋白，一种肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白。缺乏功能性肌萎缩蛋白会导致肌肉无力、退行性变，并最终导致心脏和呼吸衰竭。由于对受影响的个体仍然没有治愈方法，因此正在不断评估可能治疗或至少减轻这种疾病症状的药理化合物。多效剂，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A (HMG-CoA)还原酶抑制剂，即他汀类药物，已被建议在DMD小鼠模型中发挥有益作用。另一方面，也有报道称它们会诱发骨骼肌肌病。因此，我们决定验证辛伐他汀可能被认为是一种潜在的DMD治疗药物的假设。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

通过握力测量、跑步机试验、单肌力估计、酶学分析、肌肉损伤组织学分析、基因表达评估和免疫荧光染色等方法研究辛伐他汀相关的肌功能改变gydF4y2BamdxgydF4y2BaDMD小鼠模型。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

在我们的研究中，辛伐他汀治疗gydF4y2BamdxgydF4y2Ba小鼠的跑步表现、握力或单个肌肉的特定力量没有得到改善。肌酸激酶和乳酸脱氢酶活性，肌肉损伤的标志，也不受辛伐他汀给药影响gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。此外，炎症、纤维化和血管生成未见明显变化。尽管辛伐他汀给药后腓肠肌中中心有核肌纤维百分比下降，但其他再生相关参数未见变化。值得注意的是，在辛伐他汀治疗组甚至发现坏死率增加gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

总之，我们的研究表明辛伐他汀不能改善DMD病理。gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

杜氏肌营养不良症(DMD)是一种进行性的，严重衰弱的，致命的遗传疾病引起的突变gydF4y2BaDMDgydF4y2Ba基因，编码dystrophin，一种427 kDa的肌动蛋白结合细胞骨架蛋白，维持肌纤维-细胞外基质的完整性，调节几种细胞通路，包括一氧化氮(NO)的产生，钙gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba以及活性氧(ROS)的产生[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba2gydF4y2Ba］．在DMD中，进行性肌肉无力以及肌肉质量和功能的丧失是几个病理过程的结果，即坏死、炎症、纤维化和氧化应激增加，这是不平衡再生过程的结果(在[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba])。最近的发现和我们的研究也强调了血管生成失调是伴随肌肉功能不全的另一种机制[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba］．随着病情的发展，DMD患者会丧失行走能力，最终在生命的第二至第三十年因心脏或呼吸衰竭而死亡[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba，gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

考虑到可能影响DMD进展的过程的多样性和开发有效治疗方法的不断需要，提出了对这种迄今为止无法治愈的疾病产生有益影响的新因素。在我们之前的研究中，我们发现血红素加氧酶-1的缺乏(gydF4y2BaHmox1gydF4y2Ba， HO-1)是一种血红素降解酶，具有抗氧化和细胞保护活性，可导致更严重的疾病状态，包括炎症和纤维化的加重[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．gydF4y2BaHmox1gydF4y2Ba表达可能受到大量化合物的调控，包括3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A (HMG-CoA)还原酶抑制剂[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]，俗称他汀类药物，于40年前被发现[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba用作治疗高胆固醇血症和减少动脉粥样硬化的降脂药物。有趣的是，在2015年，Whitehead等人首次表明辛伐他汀改善肌肉健康，减少炎症和氧化应激，并增加自噬gydF4y2BamdxgydF4y2Ba动物(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]和Kim等人报道了对心脏功能的有益作用[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．同样，Amor等人认为辛伐他汀治疗可作为DMD的潜在治疗药物，因为其在调节胆固醇代谢方面的作用[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．然而，辛伐他汀的其他研究[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]和瑞舒伐他汀[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba并没有在DMD的动物模型中证实这些良好的特性。gydF4y2Ba

相关的是，即使他汀类药物对肌肉的破坏性作用也有报道，然而，在体外诱导有害作用所需的浓度远远超出了生理范围，通常大于1 μM。这种浓度比在人体内发现的浓度高很多(100-1000倍)[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

他汀类药物治疗后不同类型肌病在人类中的发生率也存在差异。先前的研究表明此类不良反应的风险很高，例如，显示一般人群中10%的他汀类药物使用者会受到影响[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba］．值得注意的是，最近对临床试验的系统回顾发现，与安慰剂对照组相比，他汀类药物服用者出现不良肌肉症状的风险极低[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．特别是，与每天服用20至40 mg辛伐他汀的患者相比，每天服用80 mg辛伐他汀的患者观察到肌病的高风险，表明暴露依赖性肌毒性。此外，特定遗传变异的风险和严重程度可能会增加，特别是那些影响血液他汀类药物水平的遗传变异(例如，SLCO1B1编码有机阴离子转运多肽OATP1B1，已被证明可调节他汀类药物的肝脏摄取)或已知影响他汀类药物代谢的联合药物(例如，环孢素)[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba］．他汀类药物相关的肌肉症状似乎也会因其他因素而加重，包括运动[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]、年龄较大及女性[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．另一方面，Iwere和Hewitt表明，即使在老年患者(65岁以上)中，他汀类药物诱发肌病的风险与安慰剂患者相当[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]，最近也得到了Zhou等人的证实。[gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．这些数据表明，在许多情况下，对他汀类药物引起的肌病的恐惧可能被高估了。值得注意的是，上述他汀类药物诱发肌病的危险因素与患有DMD的男孩无关。然而，不能排除DMD患者肌肉损伤本身可能是他汀类药物相关肌病的潜在危险因素。gydF4y2Ba

基于已发表的他汀类药物引起的肌肉改变领域的矛盾结果[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba，gydF4y2Ba22gydF4y2Ba，gydF4y2Ba23gydF4y2Ba，gydF4y2Ba24gydF4y2Ba，gydF4y2Ba25gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]以及它们在肌肉萎缩症中的不明确作用[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba，gydF4y2Ba14gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba，gydF4y2Ba16gydF4y2Ba以及我们之前在他汀类药物作用方面的专业知识，包括血管生成过程[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba，gydF4y2Ba28gydF4y2Ba，目的是评价辛伐他汀治疗急性心肌梗死的疗效gydF4y2BamdxgydF4y2Ba动物。我们发现辛伐他汀不能调节导致营养不良进展的重要过程，如纤维化、炎症、再生、血管生成，最后，不能改善肌肉功能。因此，根据我们的研究结果，我们可以得出结论，辛伐他汀对急性心肌梗死并没有发挥有益的作用gydF4y2BamdxgydF4y2BaDMD模型。gydF4y2Ba

材料与方法gydF4y2Ba

细胞培养gydF4y2Ba

C2C12小鼠成肌细胞培养于DMEM高糖(4.5 g/l)培养基中，添加10%胎牛血清(FBS)和抗生素:链霉素(100 μg/ml)和青霉素(100 U/ml)(龙沙)。细胞保存在标准条件下(37°C, 5% COgydF4y2Ba2gydF4y2Ba，湿度95%)。用0.1 μM和1 μM浓度辛伐他汀(Sigma-Aldrich)刺激C2C12成肌细胞24 h。gydF4y2Ba

动物gydF4y2Ba

动物实验是在波兰Kraków的第二届机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准后，根据国家和欧洲立法进行的(批准编号:323/2018,301/2019,79/2021和170/2021)。研究中使用的所有小鼠都是6周大的WT和gydF4y2BamdxgydF4y2Ba如我们之前所述，在混合C57BL/10ScSn和C57BL/6×FVB背景上繁殖的F2至F5代的雄性同窝小鼠或年龄匹配的小鼠[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]，并被安置在特定的无病原体(SPF)条件下，水和食物可自由提供。用PCR方法对从尾巴上分离的DNA进行基因分型。继续给药1个月至10周龄。gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗gydF4y2Ba

激活程序基于已发布的协议[gydF4y2Ba29gydF4y2Ba］．简单地说，将4 mg辛伐他汀(Sigma-Aldrich)溶于200 μl乙醇中。加入0.1 N NaOH 300 μl，在50℃下孵育2 h，用HCl将pH调至7.2，调整原液浓度为2 mg/ml。原液保持在4°C。1个月gydF4y2BamdxgydF4y2Ba小鼠口服10 mg/kg体重(BW)辛伐他汀或溶剂灌胃(对照组)。以WT动物接收车为参照组。给药剂量的选择基于文献资料[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

辛伐他汀水平估计及药代动力学gydF4y2Ba

在波兰科学院生物化学和生物物理研究所的质谱实验室使用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对辛伐他汀及其酸形式进行了分析。在辛伐他汀给药后30分钟、1小时、2小时和4小时评估药代动力学gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。实验结束1个月后，末次治疗24 h后，测定血浆和肌肉中辛伐他汀及其代谢产物的水平。用10%乙醇(1 mg肌肉/4 μl匀浆混合物)制备肌肉匀浆。采用液-液萃取(LLE)从生物样品中分离出辛伐他汀、辛伐他汀酸形式和内标物。生物样品(血浆、肌肉匀浆)和校准器中加入洛伐他汀(250ng /ml乙腈)(Sigma-Aldrich)。分析物用甲基叔丁基醚(J.T. Baker)和50 mM乙酸铵(J.T. Baker)提取。最后，样品在50%乙腈(J.T. Baker)中重建，并使用Waters Acquity超高效液相色谱仪(Waters)与Waters TQ-S三重四极杆质谱仪(Waters)进行分析。仪器控制和数据采集使用Waters MassLynx软件，数据处理使用Waters TargetLynx (Waters)软件。采用Waters C18色谱柱(1.7 μm, 2.1 mm × 50mm)进行色谱分离。流动相A为2mm醋酸铵(J.T. Baker)，水溶液中加入0.1%甲酸(v/v) (J.T. Baker)，流动相B为乙腈(J.T. Baker)。 The mass spectrometer was operated in multiple-reaction monitoring (MRM)-positive electrospray ionization (ESI+) mode. The concentrations of analytes were calculated using calibration standard mix derived from a series of calibrator samples by spiking standard stock solutions into water. Calibration curves were generated by comparing a ratio of the peak area of the analyzed compound to the peak of the internal standard against known analyte concentrations. The limits of quantification were 0.1 ng/ml and 0.5 ng/ml for simvastatin and acid form, respectively.

握力测定gydF4y2Ba

如前所述，在辛伐他汀给药第26天，研究人员对小鼠的基因型不了解，使用带有三角形拉杆的握力仪(Ugo Basile)评估前肢握力[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba31gydF4y2Ba］．测量重复5次，中间休息1分钟。按照TREAT-NMD SOP (gydF4y2Bahttps://treat-nmd.org/wp-content/uploads/2016/08/MDX-DMD_M.2.2.001.pdfgydF4y2Ba)，结果以3个最高测量值的平均值计算，并以绝对值表示(gydF4y2BaNgydF4y2Ba)，或以体重(gydF4y2BaNgydF4y2Ba/公斤体重)。gydF4y2Ba

跑步机测试gydF4y2Ba

跑步机疲劳测试在第29天进行，使用exo -3/6(哥伦布仪器)在15°下坡，研究者不考虑小鼠的基因型。我们采用了前面描述的协议[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba。简单地说，在每天以8米/分钟的速度进行3次15分钟的驯化后，10周大的雄性小鼠进行了疲惫跑步机测试。小鼠以5米/分钟的速度热身5分钟，然后在跑步机上以5米/分钟跑2分钟，7米/分钟跑2分钟，8米/分钟跑2分钟，10米/分钟跑5分钟，12米/分钟跑15分钟。随后，速度增加1米/分钟，最终速度为20米/分钟。每只小鼠的终点被定义为动物在10次温和触摸刺激后无法留在跑步机上。gydF4y2Ba

肌肉收缩特性gydF4y2Ba

使用Aurora 1300A: 3-in-1全动物系统(Aurora Scientific)在第30天(最后一次给药后1天)评估胫骨前肌的特定最大力，测量神经刺激对肌肉收缩的反应，刺激频率从50 Hz增加到150 Hz。确定的最大力进一步归一化为肌肉重量。在疲劳方案中，我们评估了由于50赫兹持续30秒的刺激而导致的肌肉力量随时间的下降。为了进行分析，我们确定了肌肉力量下降到基础值50%的时间。研究人员在不知道小鼠基因型的情况下进行分析。gydF4y2Ba

血细胞计数gydF4y2Ba

血液是直接从gydF4y2Ba腔静脉gydF4y2Ba使用scil Vet abc (Horiba ABX)分析edta包被管和白细胞(WBC)总数以及WBC中粒细胞、单核细胞和淋巴细胞的百分比。gydF4y2Ba

肌肉的组织学和免疫荧光分析gydF4y2Ba

为了进行组织学评估，收集肌肉后直接用OCT培养基(徕卡)预处理几分钟。之后，它们被转移到新的含oct的试管中，在液氮冷却的异戊烷中冷冻，并在−80°C下储存。然后，在低温机(Leica)上切割10 μm厚的切片，放置在之前涂有poly-的表面上gydF4y2BalgydF4y2Ba-赖氨酸载玻片，风干至少2小时，并保存在- 20°C，以便进一步分析。对4%缓冲福尔马林固定(pH 7.4)冷冻切片进行苏木精和伊红(H&E)染色和马松三色染色。为gydF4y2Ba他走时gydF4y2Ba，组织切片在梅耶尔苏木精(Sigma-Aldrich)中孵育12分钟，用自来水冲洗(15分钟)，在0.1%伊红溶液(96%乙醇和蒸馏水，7:3)中染色1.5分钟(Sigma-Aldrich)。染色后，切片在增加浓度(70%，96% (×2)， 99.8% (×2))的乙醇水溶液(POCH)中孵育，然后在二甲苯(Sigma-Aldrich)中孵育2次，并在组织流体介质(Chemilab)中密封。gydF4y2Ba马森的三色的gydF4y2Ba(三色染色(马森)试剂盒，Sigma-Aldrich)按照制造商的方案进行。染色后，切片在增加浓度的乙醇水溶液(70%，96% (×2)， 99.8% (×2))中孵育，然后在二甲苯中孵育2次，并在组织流体介质中密封(Chemilab)。分析是根据我们以前的研究进行的[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba32gydF4y2Ba在拍摄了整个组织的照片后。炎症和纤维化程度的评估使用任意单位，分别为:0 -无炎症/胶原沉积迹象;1 -任何白细胞浸润、肌纤维肿胀/胶原沉积的征象;2 .可见炎症、肌纤维肿胀、横纹肌溶解/胶原沉积;3 -炎症、肌纤维肿胀和横纹肌溶解的征象，约占视野的一半/胶原沉积约占视野的一半;4 -视野内大部分肌肉浸润退化/胶原蛋白沉积占视野内大部分。在H&E染色的基础上分析中心有核纤维(CNF)的再生水平;随机取10-15张照片/组织切片，计算CNF在所有纤维中的百分比。gydF4y2Ba

免疫荧光染色gydF4y2BaCD31 /αsma -gydF4y2Ba阳性血管按我们之前所描述的进行，并进行了轻微修改[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba］．用一抗:大鼠抗小鼠CD31 (BD Pharmingen, 550274)和兔抗人α-SMA (Abcam, ab5694)，用二抗:山羊抗大鼠Alexa Fluor 488(检测α-SMA)和山羊抗兔Alexa Fluor 568(检测CD31)孵育。拍摄全组织照片，定量分析各肌区CD31/α- sma阳性血管。结果以每个区域的血管数量表示。gydF4y2BaPax7 /层粘连蛋白gydF4y2Ba如前所述进行共染色[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba31gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba坏死gydF4y2BaIgG/IgM/IgA(山羊抗小鼠IgG, IgM, IgA Alexa Fluor 488抗体，赛默飞世尔科学公司)与层粘连蛋白α2(兔抗小鼠抗体，Abcam, ab11576;二抗:山羊抗兔Alexa Fluor 568)，以染色肌肉中坏死纤维的百分比显示。评估gydF4y2Ba肌肉横截面积(CSA)和平均纤维面积gydF4y2Ba是由使用组织学分割(SMASH)的半自动肌肉分析确定的[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]基于层粘连蛋白免疫荧光染色。gydF4y2Ba

染色在尼康Eclipse T下可见gydF4y2Ba我gydF4y2Ba荧光显微镜。所有组织学评估均由研究人员使用ImageJ软件对小鼠组进行盲分析。如果有必要，亮度和/或对比度调整为所有图片相同。gydF4y2Ba

血清CK和乳酸脱氢酶浓度测定gydF4y2Ba

为了评估CK和LDH的活性，分别使用Liquick Cor-CK和Liquick Cor-LDH诊断试剂盒，根据制造商协议(Cormay)。血液是从gydF4y2Ba腔静脉gydF4y2Ba在室温下凝固30分钟，然后在2000年4℃离心10分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba．该试验是使用透明血清进行的，没有溶血的迹象。然后将吸光度值转换为CK和LDH (U/l)。gydF4y2Ba

RNA分离、逆转录(RT)和实时定量PCR (qRT-PCR)gydF4y2Ba

收集的肌肉在RNA中受到保护gydF4y2Ba晚些时候gydF4y2Ba(Sigma-Aldrich)，在液氮中快速冷冻，并储存在- 80°C用于下游分析。RNA与我们之前的研究一样被分离出来[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]使用Chomczynski-Sacchi方法[gydF4y2Ba35gydF4y2Ba］．其质量和浓度由纳米滴分光光度计(赛默飞世尔科学公司)测定。qRT-PCR方法如前所述[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]使用StepOne Plus Real-Time PCR (Applied Biosystems - Thermo Fisher Scientific)和SYBR Green PCR Master Mix (Sigma-Aldrich)，特异性引物(列于表中gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)和重组M-MuLV逆转录酶RT反应获得的cDNA(赛默飞世尔科学公司)。gydF4y2BaEef2gydF4y2Ba被用作管家基因。将miR-1、miR-133a-3p和miR-206的表达归一化至构成性SNORD68基因(LNA miRCURY RT-PCR Kit和miRCURY LNAgydF4y2BaTMgydF4y2BamiRNA PCR检测)。基于比较周期阈值(CgydF4y2BatgydF4y2Ba)方法(根据2gydF4y2Ba——ΔCtgydF4y2Ba公式ΔCgydF4y2BatgydF4y2Ba= CgydF4y2Ba感兴趣的T基因gydF4y2Ba- CgydF4y2BatgydF4y2BaEef2 / SNORD68gydF4y2Ba)，并以相对表达形式与载体处理的WT动物进行比较。gydF4y2Ba

表1 qRT-PCR检测基因表达的引物序列gydF4y2Ba
全尺寸表gydF4y2Ba

酶联免疫吸附试验(ELISA)gydF4y2Ba

肌肉碎片在液氮中快速冷冻，使用TissueLyser (QIAGEN)在1% Triton X-100 PBS中均质，并离心(7000gydF4y2BaggydF4y2Ba， 10分钟，4℃)。收集蛋白裂解物，用双辛酸(BCA, Sigma-Aldrich)法测定总蛋白浓度。根据供应商的说明(研发系统)，使用100微克蛋白质裂解液来测定血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子-2 (FGF2)、endoglin (CD105)和基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)的水平。为了评估骨桥蛋白(OPN)的水平，对750倍稀释的小鼠血清进行了测试，并根据制造商的方案(R&D系统)根据吸光度值对浓度进行量化。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

数据以均数±标准差表示。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)和Tukey事后检验(post - hoc test)检验组间差异是否有统计学意义;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05被认为是显著的。这些异常值是根据Grubb测试确定的。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响大鼠CK和LDH活性gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba

以10 mg/kg体重/天的剂量口服辛伐他汀1个月没有导致动物体重的变化(图2)。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．此外，血细胞分析未显示他汀类药物治疗对WBC有任何不利影响(图。gydF4y2Ba1 bgydF4y2Ba)，粒细胞(图;gydF4y2Ba1 cgydF4y2Ba)、单核细胞(图;gydF4y2Ba1 dgydF4y2Ba)和淋巴细胞(图;gydF4y2Ba1 egydF4y2Ba)，在实验结束时进行测量。gydF4y2Ba

图1gydF4y2Ba
图1gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响WBC丰度、CK和LDH活性。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba辛伐他汀治疗期间体重(BW)变化;gydF4y2BangydF4y2Ba= 10 - 15 /组。结果以初始体重百分比(平均值±SEM)表示。gydF4y2BaBgydF4y2Ba外周血中白细胞(WBC)数量不变;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组。增加百分比gydF4y2BaCgydF4y2Ba粒细胞和gydF4y2BaDgydF4y2Ba与没有辛伐他汀作用的WT小鼠相比，营养不良动物单核细胞的增加。gydF4y2BaEgydF4y2Ba与没有辛伐他汀相关变化的WT小鼠相比，营养不良动物的淋巴细胞百分比减少。gydF4y2BaFgydF4y2Ba血清CK活性增强gydF4y2BamdxgydF4y2Ba在辛伐他汀治疗的营养不良小鼠中，药物没有效果的动物;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组。gydF4y2BaGgydF4y2Ba血清乳酸脱氢酶活性增加gydF4y2BamdxgydF4y2Ba没有辛伐他汀相关改变的小鼠;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组。结果以均数±SEM表示;gydF4y2Ba**gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01，gydF4y2Ba＊＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001gydF4y2Ba

全尺寸图像gydF4y2Ba

DMD的特征之一是肌肉损伤的血清标志物水平升高[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba］．因此，CK的活性(图;gydF4y2Ba1 fgydF4y2Ba)和LDH(图;gydF4y2Ba1克gydF4y2Ba)在营养不良的动物中显著增加，对药物管理没有影响。gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不能改善运动能力，前肢握力和收缩特性gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba

为了评估他汀类药物治疗的功能效果，我们进行了三种类型的测试。跑步机衰竭实验没有显示辛伐他汀治疗的跑步能力有任何差异gydF4y2BamdxgydF4y2Ba与载体处理的小鼠相比(图;gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)．同样，营养不良动物在服用辛伐他汀后的前肢握力测试中，肌肉功能没有改变(图2)。gydF4y2Ba2 b, CgydF4y2Ba)．此外，当使用Aurora系统测量胫骨前肌收缩力时，在最大力测量和疲劳分析方面均未发现明显改善(图2)。gydF4y2Ba2 d, EgydF4y2Ba),分别。gydF4y2Ba

图2gydF4y2Ba
图2gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗后，运动能力、握力和肌肉收缩力没有改变。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba下坡跑步机试验表现为试验期间小鼠跑步的总距离gydF4y2BangydF4y2Ba= 5-8 /组，均值±SEM。gydF4y2BaBgydF4y2Ba前肢握力分析显示为绝对值或gydF4y2BaCgydF4y2Ba按体重换算(gydF4y2BaNgydF4y2Ba/公斤);gydF4y2BangydF4y2Ba= 5-8 /组，均值±SEM。gydF4y2BaDgydF4y2Ba比最大力gydF4y2BaEgydF4y2Ba胫骨前肌疲劳分析使用Aurora系统进行原位肌肉收缩测量;gydF4y2BangydF4y2Ba= 4 - 7;均值±SEM;gydF4y2Ba＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,gydF4y2Ba**gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01gydF4y2Ba

全尺寸图像gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响营养不良肌的炎症gydF4y2Ba

在营养不良动物的腓肠肌和膈肌中观察到炎症细胞浸润的急剧加剧;然而，H&E染色未显示辛伐他汀对炎症有任何影响，无论所分析的肌肉类型如何(图2)。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba，补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaA).相应地，血红素加氧酶-1 (gydF4y2BaHmox1gydF4y2Ba)，一种炎症和氧化应激在营养不良动物中增强的标志，在腓肠肌中也没有受到治疗的影响(图。gydF4y2Ba3 bgydF4y2Ba)或隔膜(补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaB).肌肉坏死，通过免疫荧光染色的IgG/IgM/IgA(膜不渗透标记物)评估，辛伐他汀治疗后肌肉坏死甚至加剧，辛伐他汀治疗后腓肠肌坏死纤维数量增加就是证据gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠(图。gydF4y2Ba3 cgydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

图3gydF4y2Ba
图3gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不能减轻腓肠肌炎症和纤维化gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba腓肠肌苏木精、伊红染色及炎症半定量分析代表图;比例尺:100 μm;均值±SEM;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组。gydF4y2BaBgydF4y2Ba不受辛伐他汀治疗影响的表达gydF4y2BaHmox1gydF4y2Ba腓肠肌基因，以均数±SEM表示;gydF4y2BangydF4y2Ba= 10 - 13;中存在。gydF4y2BaCgydF4y2Ba利用IgM/IgG/IgA与层粘连蛋白(红色)结合(绿色)的免疫荧光染色进行坏死评估，其计算形式为平均值±SEM;gydF4y2BangydF4y2Ba= 6-13 /组;比例尺:100 μm。gydF4y2BaDgydF4y2Ba马松三色染色与胶原沉积半定量分析的代表性照片显示辛伐他汀治疗动物腓肠肌纤维化程度无变化;比例尺:100 μm;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 /组。gydF4y2BaEgydF4y2Ba不受辛伐他汀治疗影响的表达gydF4y2BaSpp1gydF4y2Ba腓肠肌基因，以均数±SEM表示;gydF4y2BangydF4y2Ba= 10 - 14;中存在。gydF4y2BaFgydF4y2Ba血清纤维化标志物OPN蛋白水平gydF4y2BangydF4y2Ba= 10-13 /组，均值±SEM;ELISA。gydF4y2BaGgydF4y2Ba未被治疗改变的纤维化标志物的表达:gydF4y2BaTgfb1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaMmp11gydF4y2Ba的腓肠肌gydF4y2BamdxgydF4y2Ba和小鼠的显著下降gydF4y2BaCol1a1gydF4y2Ba信使rna;gydF4y2BangydF4y2Ba= 12-14 /组，虚线标记WT水平;中存在。数据以均数±标准差表示;gydF4y2Ba＊gydF4y2Ba为gydF4y2BamdxgydF4y2Bavehicle vs. WT和# forgydF4y2BamdxgydF4y2Ba辛伐他汀vs。gydF4y2BamdxgydF4y2Ba车辆比较;gydF4y2Ba＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,gydF4y2Ba**gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01,gydF4y2Ba＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001,gydF4y2Ba＊＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001，和gydF4y2Ba＃gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05gydF4y2Ba

全尺寸图像gydF4y2Ba

辛伐他汀不能减少营养不良动物的纤维化gydF4y2Ba

在营养不良肌中，胶原沉积清晰可见;然而，三色染色半定量分析显示，辛伐他汀治疗并没有减弱腓肠肌的纤维化(图2)。gydF4y2Ba3 dgydF4y2Ba)和膜片(补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaC)的肌肉。值得注意的是，mRNA (gydF4y2BaSpp1gydF4y2Ba)和OPN蛋白水平升高，OPN是纤维化的标志之一gydF4y2BamdxgydF4y2Ba他汀类药物治疗对小鼠无影响(图;gydF4y2Ba3 e, FgydF4y2Ba，补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaD)。此外，其他纤维化因子的增强表达，包括转化生长因子- 1 (gydF4y2BaTgfb1gydF4y2Ba)和基质金属蛋白酶11 (gydF4y2BaMmp11gydF4y2Ba)在两组被分析肌肉中都没有变化(图。gydF4y2Ba3 ggydF4y2Ba，补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaE)。虽然I型胶原α 1链显著减少(gydF4y2BaCol1a1)gydF4y2Ba腓肠肌(图;gydF4y2Ba3 ggydF4y2Ba)，在横膈膜中没有发现这种影响(补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaE)。gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响肌肉再生gydF4y2Ba

经车辆处理的纤维的尺寸似乎更小gydF4y2BamdxgydF4y2Ba与野生型小鼠相比(图;gydF4y2Ba4 a、BgydF4y2Ba)，而辛伐他汀治疗后，营养不良动物腓肠肌的平均纤维大小增加(图2)。gydF4y2Ba4 a、BgydF4y2Ba)．同时辛伐他汀治疗组CNF发生率较低gydF4y2BamdxgydF4y2Ba将小鼠与对照组进行比较;然而，与WT动物相比，它仍然大大增加，在WT动物中几乎没有发现具有中心核的纤维(图2)。gydF4y2Ba4摄氏度gydF4y2Ba)．相反，横膈膜内他汀类药物治疗后，纤维大小、平均纤维大小和CNF未见变化，尽管WT和CNF之间存在差异gydF4y2BamdxgydF4y2Ba动物仍然突出(补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaF-H)。gydF4y2Ba

图4gydF4y2Ba
图4gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响腓肠肌的肌肉再生gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2BaBgydF4y2Ba基于层粘连蛋白染色的肌纤维大小定量(未显示);gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组;均数±SEM。gydF4y2BaCgydF4y2Ba在H&E染色的基础上对CNF进行了定量分析，并对CNF的代表性照片进行了分析gydF4y2BamdxgydF4y2Ba用辛伐他汀治疗的动物与对照组比较;比例尺:100 μm;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组;均数±SEM。gydF4y2BaDgydF4y2Ba肌球蛋白重链亚型编码基因表达:gydF4y2BaMyh3gydF4y2Ba，表示为均值±SEM;gydF4y2BangydF4y2Ba= 10 - 13;中存在。gydF4y2BaEgydF4y2Ba辛伐他汀治疗后营养不良动物腓肠肌中FGF2蛋白水平的变化gydF4y2BangydF4y2Ba= 10 - 13 /组;以均数±SEM表示;ELISA。gydF4y2BaFgydF4y2BamyomiRs:辛伐他汀治疗后腓肠肌中miR-1、miR-133a-3p和miR-206的表达gydF4y2BamdxgydF4y2Ba动物表现为均值±SEM;gydF4y2BangydF4y2Ba= 12 - 14;以虚线表示的WT电平;放大器中存在。gydF4y2BaGgydF4y2Ba腓肠肌pax7阳性卫星细胞的定量分析及代表性照片比例尺:100 μm;gydF4y2BangydF4y2Ba= 9 - 12 /组;均值±SEM;gydF4y2Ba＊gydF4y2Ba为gydF4y2BamdxgydF4y2Ba辛伐他汀vs。gydF4y2BamdxgydF4y2Ba车辆和gydF4y2Ba＄gydF4y2Ba为gydF4y2BamdxgydF4y2Ba整车与WT比较;gydF4y2Ba＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,gydF4y2Ba＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001,gydF4y2Ba＊＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001,gydF4y2Ba$ $ $gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001,gydF4y2Ba$ $ $ $gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001gydF4y2Ba

全尺寸图像gydF4y2Ba

重要的是，胚胎肌球蛋白重链亚型的表达gydF4y2BaMyh3gydF4y2Ba，编码eMyHC，尤其与肌肉再生有关[gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]，尽管在缺乏抗肌萎缩蛋白的载体组增加，但他汀类药物治疗不影响(图。gydF4y2Ba4 dgydF4y2Ba)．此外，再生过程中FGF2蛋白水平上调[gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]，在接受辛伐他汀的动物腓肠肌中没有显著变化(图2)。gydF4y2Ba4 egydF4y2Ba)．因为microRNAs，尤其是所谓的myomiRs，在肌肉再生中发挥着重要作用[gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]，我们决定检测miR-1、miR-133a-3p和miR-206这三种mirna的表达。在载体处理中，miR-1和miR-133-3p显著下调，miR-206明显上调gydF4y2BamdxgydF4y2Ba但辛伐他汀不能改变它们的表达(图。gydF4y2Ba4 fgydF4y2Ba)．此外，当估计腓肠肌中pax7阳性卫星细胞的数量时，我们观察到，在辛伐他汀给药没有进一步影响的情况下，用载具治疗的营养不良动物的pax7阳性卫星细胞数量显著升高。gydF4y2Ba4 ggydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响营养不良肌的血管生成标志物和血管化gydF4y2Ba

最近的发现强调了血管生成失调在DMD病理中的作用[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba31gydF4y2Ba，gydF4y2Ba40gydF4y2Ba］．在我们之前的研究中，我们发现他汀类药物对VEGF合成和整体血管生成活性的浓度和细胞类型依赖作用[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba，gydF4y2Ba41gydF4y2Ba，gydF4y2Ba42gydF4y2Ba］．而在C2C12小鼠中，辛伐他汀生理相关浓度(0.1 ~ 1 μM)对成肌细胞系无影响gydF4y2BaVegfagydF4y2Ba（gydF4y2Ba补充图3gydF4y2Ba)．在体内，辛伐他汀对营养不良动物的治疗并没有引起大多数情况下已经减少的血管生成基因表达的任何改变，如gydF4y2BaVegfagydF4y2Ba，激酶插入结构域受体(gydF4y2BaKdrgydF4y2Ba)、血管生成素-1 (gydF4y2BaAng1gydF4y2Ba)和C-X-C基序趋化因子12 (gydF4y2BaCxcl12gydF4y2Ba)，也称为基因编码基质细胞衍生因子1 (SDF-1)(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)．重要的是，VEGF(图;gydF4y2Ba5 bgydF4y2Ba)，以及SDF-1(图;gydF4y2Ba5度gydF4y2Ba)和endoglin (CD105)(图;gydF4y2Ba5 dgydF4y2Ba)蛋白质水平，也不受影响。此外，在横膈膜中观察到他汀类药物治疗对分析因素没有影响，无论是mRNA还是蛋白质水平(补充图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba模拟)。另外，当CD31的数目gydF4y2Ba+gydF4y2Ba/αsmagydF4y2Ba+gydF4y2Ba腓肠肌血管的评价，他汀类药物治疗后无差异(图。gydF4y2Ba5 egydF4y2Ba)．有趣的是，CD31的数量显著增加gydF4y2Ba+gydF4y2Ba/αsmagydF4y2Ba+gydF4y2Ba在横膈膜观察到血管，显示不同肌肉之间的差异(补充图。gydF4y2Ba2gydF4y2BaE)。gydF4y2Ba

图5gydF4y2Ba
图5gydF4y2Ba

辛伐他汀治疗不影响营养不良动物腓肠肌血管生成标志物。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba血管生成相关基因mRNA水平下降gydF4y2BaVegfagydF4y2Ba，gydF4y2BaKdrgydF4y2Ba,gydF4y2BaCxcl12gydF4y2Ba在处理过的腓肠肌中gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠没有变化gydF4y2BaAng1gydF4y2Ba；gydF4y2BangydF4y2Ba= 11 - 15号/组;以均数±SEM表示;以虚线表示的WT电平;中存在。未受影响的蛋白质水平gydF4y2BaBgydF4y2BaVEGF,gydF4y2BaCgydF4y2BaSDF-1,gydF4y2BaDgydF4y2BaCD105在接受他汀的动物腓肠肌中的表达;gydF4y2BangydF4y2Ba=卖地/组;ELISA，均数±SEM。gydF4y2BaEgydF4y2Ba基于CD31/α-SMA双染色对血管进行定量分析和代表性照片，结果显示两组无差异gydF4y2Ba的gydF4y2Ba腓肠肌gydF4y2BamdxgydF4y2Ba用辛伐他汀治疗的动物与对照组比较;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6 /组;以均数±SEM表示;比例尺:100 μm;gydF4y2Ba＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,gydF4y2Ba**gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01,gydF4y2Ba＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001,gydF4y2Ba＊＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001gydF4y2Ba

全尺寸图像gydF4y2Ba

辛伐他汀及其活性形式在给药后水平迅速下降gydF4y2Ba

为了确定我们的研究中辛伐他汀效应的缺乏是否可以用低血浆水平和药物的肌肉分布不充分来解释，我们对辛伐他汀及其活性酸形式进行了药代动力学分析。我们的结果显示血浆中辛伐他汀及其代谢物均可检测到浓度(图2)。gydF4y2Ba6 a、BgydF4y2Ba)和横膈膜(图。gydF4y2Ba6 c, DgydF4y2Ba有趣的是，在腓肠肌中，我们无法检测到辛伐他汀，而活性代谢物的浓度远低于横膈膜(图2)。gydF4y2Ba6 egydF4y2Ba)．重要的是，血浆和膈肌中辛伐他汀活性形式的水平明显高于辛伐他汀的相应水平，这是预期的，因为辛伐他汀的激活是在体内给药之前通过口服灌胃进行的。gydF4y2Ba

图6gydF4y2Ba
图6gydF4y2Ba

辛伐他汀和辛伐他汀活性代谢物浓度在给药后迅速下降。辛伐他汀水平gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba等离子体和gydF4y2BaCgydF4y2Ba隔膜。辛伐他汀酸分析gydF4y2BaBgydF4y2Ba等离子体gydF4y2BaDgydF4y2Ba隔膜,gydF4y2BaEgydF4y2Ba最后一次给药后30分钟、1小时、2小时、4小时和24小时腓肠肌;gydF4y2BangydF4y2Ba= 4 - 5;gydF4y2Ba＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,gydF4y2Ba**gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01,gydF4y2Ba＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001，且gydF4y2Ba＊＊＊＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001gydF4y2Ba

全尺寸图像gydF4y2Ba

然而，在所有测试的样本中，两种形式的水平随着时间的推移迅速下降。此外，当每月最后一次给药24小时后评估辛伐他汀和辛伐他汀酸形式的浓度时，所有样本中都检测不到它们的水平。gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

尽管经过多年的深入研究，DMD仍然是一种不治之症。最新的、最有前途的疗法，使用基因改造的最新进展，即CRISPR/Cas9技术，仍远未被临床引入和接受。因此，糖皮质激素一直是DMD患者的金标准治疗方法。不幸的是，除了对DMD病理无疑的有益影响外，日常服用它们被证明会产生许多副作用，导致骨质疏松症、糖尿病或肌肉萎缩[gydF4y2Ba43gydF4y2Ba］．由于不断需要研究新的策略，至少可以减轻疾病的严重程度，许多研究人员不仅关注新药的发现，而且还关注现有药物的重新利用。gydF4y2Ba

HMG-CoA还原酶抑制剂，通常被称为他汀类药物，似乎是这种研究的完美选择。尽管关于他汀类药物诱发的肌病、肌炎和横纹肌溶解的讨论仍在继续[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba23gydF4y2Ba，gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]最近的研究表明，这种治疗的好处超过了可能的风险，值得注意的是，这种风险通常与DMD男孩无关[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．多项研究表明他汀类药物对骨骼肌整体健康有积极作用，包括抗炎和抗纤维化特性[gydF4y2Ba45gydF4y2Ba，gydF4y2Ba46gydF4y2Ba］．Whitehead等人已经在2015年证明了辛伐他汀对营养不良动物的保护作用[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba］gydF4y2Ba，gydF4y2Ba同样，Amor等人今年发表了有希望的结果。[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．另一方面，Verhaart等人在2020年发表的文章描述了这种治疗缺乏效果[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．此外，当其他小组研究不同的他汀类药物时，结果是不确定的。另一种fda批准的降胆固醇药物普伐他汀被提议上调utrophin A的表达[gydF4y2Ba47gydF4y2Ba]，是一种dystrophin的常染色体同源物，可补偿其在DMD肌肉中的损失[gydF4y2Ba48gydF4y2Ba］．另一方面，Finkler等人证明瑞舒伐他汀没有任何有益作用，甚至在治疗时观察到明显的炎症增加[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

在我们的研究中，辛伐他汀不能缓解营养不良的肌肉病理，甚至在给药后，在营养不良的动物中检测到坏死纤维的比例明显更高，这可能表明肌肉状况恶化。然而，没有其他测试参数似乎证实疾病的加重，因为CK水平没有升高，与他汀类药物诱导的肌病密切相关[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]，在辛伐他汀治疗1个月后观察。此外，将辛伐他汀治疗的动物与对照组相比，在WBC总量或不同亚群(如粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)方面，未观察到显著或令人担忧的系统性变化gydF4y2BamdxgydF4y2Ba试验结束时，试验组为对照组。gydF4y2Ba

与Whitehead等人的结果相反，其结果显示炎症细胞浸润明显减少[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]，我们没有观察到辛伐他汀的抗炎潜力。此外，表达的gydF4y2BaHmox1gydF4y2Ba基因，编码抗氧化剂和细胞保护HO-1酶也不受影响。Verhaart等人也得到了类似的结果。[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]，与我们相比，他们报告即使延长给药时间2个月，对炎症也没有影响。此外，与已发表的辛伐他汀抗纤维化作用的数据相反gydF4y2BamdxgydF4y2Ba动物(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]，我们没有观察到任何治疗对纤维化的影响，无论是胶原沉积的组织学评估还是纤维化相关基因的表达。这些观察结果通过OPN表达的评估得到了证实，OPN是最近描述的与再生、炎症和纤维化相关的DMD生物标志物[gydF4y2Ba49gydF4y2Ba，gydF4y2Ba50gydF4y2Ba]，辛伐他汀也没有改变。gydF4y2Ba

当对腓肠肌进行调查时，我们注意到平均肌纤维大小显著增加，CNF数量减少。然而，在其他与再生相关的参数，如表达gydF4y2BaMyh3gydF4y2Ba基因，FGF2蛋白，肌肉特异性肌myirs (miR-1, miR-133a-3p和miR-206)，或pax7阳性卫星细胞的数量。同样，Whitehead等人和Verhaart等人也没有证明辛伐他汀对营养不良肌再生有影响。[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

更重要的是，在我们的研究中，辛伐他汀治疗既不影响动物的运动能力和前肢握力，也不影响肌肉收缩性能。有趣的是，当Whitehead等人测量肌肉的比力时。gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]和Verhaart等人。[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]，分别表现出明显的改善和没有任何效果。gydF4y2Ba

为了扩展已经描述的知识，我们决定研究血管生成的调节，这是DMD进展的另一个方面。他汀类药物的改善内皮功能和血管保护作用是公认的[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba，gydF4y2Ba51gydF4y2Ba］．重要的是，我们之前的研究揭示了血管生成的改变gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba31gydF4y2Ba]这也可能与年龄有关[gydF4y2Ba40gydF4y2Ba］．同样，在本研究中发现腓肠肌血管生成基因在mRNA和蛋白水平上表达显著下降，但辛伐他汀治疗没有任何影响。相应的，CD31/α-SMA双阳性血管丰度未见变化。尽管膈血管数量增加，但没有其他研究因素受到影响，提示辛伐他汀给药对血管生成没有深刻影响。值得注意的是，这表明辛伐他汀可能不会以相同的方式影响各种肌肉。gydF4y2Ba

总之，我们的研究，根据Verhaart等人的工作。gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]和Finkler等人[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]，不支持他汀类药物对DMD有积极作用的假设。Whitehead等人发现的不一致结果[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]可能与应用方法上的一些分歧有关，包括小鼠的年龄和遗传背景，使用的他汀类药物的类型和剂量，给药途径，以及给药给动物的时间长度。然而，多样化的策略无疑为从不同角度和疾病进展的不同阶段研究他汀类药物的影响提供了机会。在我们的研究中，辛伐他汀的剂量为10 mg/kg/d。在这方面，所采用的方法与其他小组所使用的方法相似[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．此外，尽管Whitehead等人在食物和水中提供辛伐他汀时获得了最有希望的结果[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]，考虑到辛伐他汀在循环中的半衰期较短，我们强烈认为口服灌胃给药更有意义。更重要的是，这种给药途径提供了更精确地控制给定剂量的机会。重要的是，我们的药代动力学实验表明，活性代谢物辛伐他汀酸在血浆和测试肌肉中可检测到，在横膈膜中获得的浓度最高。值得注意的是，由于浓度随着时间的推移而迅速下降，我们不能排除需要更高剂量的药物才能获得有益的治疗结果的可能性，并且根据我们的测量，该水平远低于Whitehead等人报道的水平。[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]，在食物中给予相同剂量的辛伐他汀导致血浆水平为170 ng/mL。另一方面，我们的数据与Verhaart等人的结果更具可比性[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]，尽管在该研究中没有明确指出是否测量了他汀类药物或其代谢物的水平。辛伐他汀缺乏保护作用可能与治疗时间相对较短有关。然而，在长达一个月的实验后，我们甚至观察到坏死纤维的百分比显著增加，这并不完全支持进行更长时间的辛伐他汀治疗。值得注意的是，在Verhaart等人的研究中，延长至12周并没有增加血浆辛伐他汀水平，也没有改善[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．此外，必须强调的是，Whitehead等人和Verhaart等人使用的小鼠维持在C57BL/6J遗传背景上[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]，而在我们的研究中，我们使用C57BL/10ScSn和C57BL/6×FVB混合背景培育的小鼠。这是由于我们之前和正在进行的关于DMD进展的各种调节剂的研究，最初是通过将HO-1缺陷动物(C57BL/6×FVB背景)与HO-1在营养不良小鼠中的作用进行研究而开始的gydF4y2BamdxgydF4y2Ba小鼠(C57BL/10ScSn背景)[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．重要的是，我们的结果与Verhaart等人的研究一致，表明辛伐他汀效应的缺乏与背景无关。gydF4y2Ba

尽管如此，在未来的研究中应该仔细考虑所进行的实验中的差异。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

总之，我们证明辛伐他汀对DMD的病理无显著影响gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。我们的结果不支持他汀类药物是DMD潜在治疗选择的假设。gydF4y2Ba

数据和材料的可用性gydF4y2Ba

本研究中使用和/或分析的数据集可根据合理要求从通讯作者处获得。gydF4y2Ba

缩写gydF4y2Ba

αsma:gydF4y2Ba

平滑肌肌动蛋白gydF4y2Ba

Ang1gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

检验1gydF4y2Ba

CD105:gydF4y2Ba

105分化簇，EndoglingydF4y2Ba

CD31:gydF4y2Ba

分化簇31gydF4y2Ba

CK:gydF4y2Ba

肌酸激酶gydF4y2Ba

Col1a1gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

I型胶原α 1gydF4y2Ba

CNF:gydF4y2Ba

中心有核纤维gydF4y2Ba

客服人员:gydF4y2Ba

横截面积gydF4y2Ba

Cxcl12gydF4y2BaSDF-1:gydF4y2Ba

C-X-C基序趋化因子配体12，基质细胞衍生因子1gydF4y2Ba

及其它:gydF4y2Ba

Dystrophin-glycoprotein复杂gydF4y2Ba

模式:gydF4y2Ba

杜氏肌营养不良症gydF4y2Ba

以挪士:gydF4y2Ba

内皮型一氧化氮合酶gydF4y2Ba

FGF2:gydF4y2Ba

成纤维细胞生长因子2gydF4y2Ba

HMEC-1:gydF4y2Ba

人微血管内皮细胞gydF4y2Ba

β-:gydF4y2Ba

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶AgydF4y2Ba

Hmox1,gydF4y2BaHO-1:gydF4y2Ba

血红素oxygenase-1gydF4y2Ba

HUVEC:gydF4y2Ba

人脐静脉内皮细胞gydF4y2Ba

KdrgydF4y2Ba：gydF4y2Ba

VEGF受体(VEGF- r2)gydF4y2Ba

LDH:gydF4y2Ba

乳酸脱氢酶gydF4y2Ba

Mmp11gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

基质金属蛋白酶11gydF4y2Ba

msc:gydF4y2Ba

肌肉卫星细胞gydF4y2Ba

Myh3gydF4y2BaeMyHC:gydF4y2Ba

肌凝蛋白重链3，胚胎肌凝蛋白重链gydF4y2Ba

Pax7:gydF4y2Ba

配对框7gydF4y2Ba

ROS:gydF4y2Ba

活性氧gydF4y2Ba

Spp1gydF4y2BaOPN:gydF4y2Ba

分泌的磷蛋白1、骨桥蛋白gydF4y2Ba

Tgfb1gydF4y2Ba：gydF4y2Ba

转化生长因子1gydF4y2Ba

VegfagydF4y2BaVEGF:gydF4y2Ba

血管内皮生长因子AgydF4y2Ba

参考文献gydF4y2Ba

  1. 康斯坦丁B.营养不良蛋白复合物作为信号蛋白支架的功能。生物化学与生物物理学报。2014;1838(2):635-42。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.bbamem.2013.08.023gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  2. Allen DG, Whitehead NP, Froehner SC.肌营养不良蛋白缺失破坏骨骼肌信号:Ca2+、活性氧和一氧化氮在肌营养不良发展中的作用。物理学报，2016;36(1):344 - 344。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1152/physrev.00007.2015gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  3. Łoboda A，杜拉克J.肌肉和心脏治疗策略的杜氏肌营养不良:过去，现在和未来。20. Pharmacol rep 2020;gydF4y2Ba

  4. bronisz - budzyzynska I, Chwalenia K, Mucha O, Podkalicka P, Bukowska-Strakova K, Józkowicz A，等。miR-146a缺乏不会加重mdx小鼠的肌肉营养不良。骨骼肌。2019;9(1):22。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  5. Podkalicka P, Mucha O, bronisz - budzyzynska I, Kozakowska M, Pietraszek-Gremplewicz K, Cetnarowska A，等。缺乏miR-378可减弱mdx小鼠的肌肉营养不良。JCI Insight, 2020;4:5(11)。gydF4y2Ba

    谷歌学者gydF4y2Ba

  6. 李志强，李志强，李志强，等。杜氏肌营养不良症血管新生的研究进展。细胞生物学与生物工程学报，2019;26(8):1507 - 287。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1007/s00018-019-03006-7gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  7. 帕萨马诺L，塔利亚A，帕拉迪诺A, Viggiano E, D 'Ambrosio P, Scutifero M，等。杜氏肌营养不良患者生存期的改善:835例患者的回顾性分析。肌醇学报，2012;31(2):121-5。gydF4y2Ba

    PubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  8. Birnkrant DJ, Bushby K, Bann CM, Apkon SD, Blackwell A, Brumbaugh D，等。杜氏肌营养不良症的诊断和治疗，第1部分:诊断，神经肌肉，康复，内分泌，胃肠道和营养管理。《柳叶刀神经杂志》2018;17(3):251-67。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/s1474 - 4422 (18) 30024 - 3gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  9. Pietraszek-Gremplewicz K, Kozakowska M, Bronisz-Budzynska I, Ciesla M, Mucha O, Podkalicka P，等。血红素氧合酶-1影响小鼠卫星细胞和杜氏肌营养不良的进展。抗氧化氧化还原信号。2018;29(2):128-48。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  10. 他汀类药物在心血管疾病血红素加氧酶-1激活中的作用。Curr Drug Targets. 2017;18(6): 674-86。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.2174/1389450117666160401123600gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  11. Endo A, Kuroda M, Tanzawa K. ML-236A和ML-236B真菌代谢产物对3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的竞争性抑制，具有低胆固醇活性。农学通报，1976;72(2):323-6。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/0014 - 5793 (76) 80996 - 9gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  12. 白head NP, Kim MJ, Bible KL, Adams ME, Froehner SC.辛伐他汀对肌肉萎缩症功能改善的新疗效。美国国家科学研究院。2015; 112(41): 12864 - 9。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1073/pnas.1509536112gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  13. Kim MJ, Bible KL, Regnier M, Adams ME, Froehner SC, Whitehead NP。辛伐他汀可长期改善肌萎缩症患者左心室功能并预防心肌纤维化。物理学报2019;7(6):e14018。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.14814/phy2.14018gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  14. 吴红，李志强，李志强，等。胆固醇代谢是杜氏肌营养不良的潜在治疗靶点。中国病毒质肌肉减少症杂志。2021;12(3):677-93。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1002/jcsm.12708gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  15. Verhaart IEC, Cappellari O, tanganyka -de Winter CL, Plomp JJ, Nnorom S, Wells KE，等。辛伐他汀治疗不能改善杜氏肌营养不良小鼠模型的肌肉病理生理。神经肌肉杂志2020;gydF4y2Ba

  16. 芬克勒JMG，德卡瓦略SC，圣内托H，马奎斯MJ。瑞舒伐他汀治疗对营养不良mdx小鼠心脏和骨骼肌的影响。阿纳特Rec(霍博肯)。2020年,303(8):2202 - 12所示。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1002/ar.24341gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  17. Björkhem-Bergman L，林德JD，伯格曼P.什么是相关浓度的他汀类药物在细胞实验声称多效?中国临床药物学杂志，2011;72(1):164-5。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1111/j.1365-2125.2011.03907.xgydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  18. Bruckert E, Hayem G, Dejager S, Yau C, Bégaud B.高脂血症患者大剂量他汀治疗后轻度至中度肌肉症状——PRIMO研究。心血管药物杂志2005;19(6):403-14。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1007/s10557-005-5686-zgydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  19. Fernandez G, Spatz ES, Jablecki C, Phillips PS.他汀类药物肌病:临床试验中未反映的常见困境。中华临床医学杂志，2011;28(6):393-403。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.3949/ccjm.78a.10073gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  20. Ganga HV, Slim HB, Thompson PD。临床试验中他汀类药物诱发肌肉问题的系统综述。《心脏杂志》，2014，(1):1 - 15。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.ahj.2014.03.019gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  21. Hopewell JC代表HPS S和H-TCG, Offer A代表HPS S和H-TCG, Haynes R代表HPS S和H-TCG等。辛伐他汀相关肌病的独立危险因素及与不同类型肌肉症状的相关性欧洲心脏J. 2020;41(35): 3336-42, DOI:gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1093/eurheartj/ehaa574gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

  22. 搜索合作小组，Link E, Parish S, Armitage J, Bowman L, Heath S，等。SLCO1B1变异与他汀类药物诱导的肌病——一项全基因组研究。中华外科杂志。2008年8月21日;359(8):789-99。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  23. 帕克BA，汤普森PD。他汀类药物对骨骼肌的影响:运动、肌病和肌肉结果。运动运动科学，2012,10;40(4):188-94。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1097/JES.0b013e31826c169egydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  24. Bhardwaj S, Selvarajah S, Schneider EB。他汀类药物对老年女性肌肉的影响:综述。临床研究。2013;8:47-59。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.2147/CIA.S29686gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  25. Iwere RB, Hewitt J.接受他汀类药物治疗的老年人肌病:系统回顾和荟萃分析。中国临床药物学杂志，2015 9月;80(3):363-71。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1111/bcp.12687gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  26. 周z, Albarqouni L, Curtis AJ, Breslin M, Nelson M.他汀类药物在老年人一级预防中的安全性和耐受性:一项系统综述和荟萃分析。药物老化。2020;37(3):175-85。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1007/s40266-019-00736-ygydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  27. 杜拉克J，罗博达A，贾兹瓦A, Zagorska A, Dörler J, Alber H，等。阿托伐他汀影响人内皮细胞中的几种血管生成介质。内皮。2005;12(5 - 6):233 - 41。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1080/10623320500476559gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  28. 罗波达，贾兹瓦，乔兹科维茨，多洛兹J，巴拉J，莫勒马G，等。阿托伐他汀可防止缺氧诱导的内皮型一氧化氮合酶表达抑制，但不影响人微血管内皮细胞血红素氧合酶-1。动脉粥样硬化。2006;187(1):26 - 30日。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.atherosclerosis.2006.03.015gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  29. Sadeghi MM, Collinge M, Pardi R, Bender JR.辛伐他汀调节细胞因子介导的内皮细胞粘附分子诱导:抑制G蛋白的参与。中国生物医学杂志，2000;26(5):528 - 528。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.4049/jimmunol.165.5.2712gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  30. Aartsma-Rus A, van Putten M.评估mdx小鼠模型的功能性能。85.中国科学，2014;gydF4y2Ba

  31. bronisz - budzyzynska I, Kozakowska M, Podkalicka P, Kachamakova-Trojanowska N， Łoboda A, Dulak J. Nrf2在急性和慢性肌肉损伤中的作用。骨骼肌。2020;10(1):35。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1186/s13395-020-00255-0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  32. Kozakowska M, Pietraszek-Gremplewicz K, Ciesla M, Seczynska M, Bronisz-Budzynska I, Podkalicka P，等。心脏毒素致骨骼肌损伤后，血红素加氧酶-1缺乏可引起炎症反应和肌肉卫星细胞增殖。中国生物医学杂志，2018;26(2):491-506。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.ajpath.2017.10.017gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  33. Krist B, Podkalicka P, Mucha O, Mendel M, sszpioova A, Rusiecka OM，等。miR-378a影响骨骼肌血管化。中国生物医学工程学报，2015;29(4):344 - 344。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1093/cvr/cvz236gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  34. 史密斯LR，巴顿ER。SMASH -利用组织学分割半自动肌肉分析:一个MATLAB应用程序。骨骼肌。2014;4(1):21。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1186/2044-5040-4-21gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  35. 乔琴斯基，王志强，王志强，等。硫氰酸胍-苯酚-氯仿萃取分离RNA的研究。中国生物化学。1987;32(1):1 - 9。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/0003 - 2697 (87) 90021 - 2gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  36. 张文杰，张文杰，张文杰，张文杰，等。mdx小鼠模型中血清蛋白生物标志物的发现和杜氏肌营养不良患者的跨物种比较。中国生物科学。2014;23(24):6458-69。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1093/hmg/ddu366gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  37. Schiaffino S, Rossi AC, Smerdu V, Leinwand LA, Reggiani C.发育肌凝蛋白的表达模式和功能意义。骨骼肌。2015;5(1):22。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1186/s13395-015-0046-6gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  38. Anderson JE, Mitchell CM, McGeachie JK, Grounds MD. SJL/J和BALB/c小鼠挤压损伤骨骼肌中碱性成纤维细胞生长因子表达的时间进程。科学通报，1995;26(2):366 - 366。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1006/excr.1995.1041gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  39. 陈晓明，张晓明，张晓明，等。循环肌myirs在骨骼肌监测中的应用。中国软骨病杂志。2018;9(1):20-7。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1002/jcsm.12227gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  40. popodkalicka P, Mucha O, Kaziród K, bronisz - budzyzynska I, Ostrowska-Paton S, Tomczyk M，等。杜氏肌营养不良mdx模型后肢缺血后肌肉血管和血流恢复的年龄依赖性失调。共同参与。2021;9(5):481。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.3390/biomedicines9050481gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  41. Loboda A, Jazwa A, Jozkowicz A, Molema G, Dulak J.人微血管内皮细胞的血管生成转录组:缺氧的影响，阿托伐他汀调节。血管药理学。2006;44(4):206-14。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.vph.2005.11.007gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  42. 李志强，李志强，李志强，等。他汀类药物对内皮细胞和血管平滑肌细胞中血管内皮生长因子合成的差异调节。动脉粥样硬化。2003;170(2):229 - 36。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/s0021 - 9150 (03) 00299 - 5gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  43. Schäcke H, Döcke WD, Asadullah K.糖皮质激素副作用的相关机制。中国药物学杂志2002;96(1):23-43。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/s0163 - 7258 (02) 00297 - 8gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  44. 托马舍夫斯基M，施托舍夫斯基KM，托马舍夫斯卡J，捷克瓦SJ。Statin-induced肌肉疾病。中国医药杂志，2011;63(4):859-66。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/s1734 - 1140 (11) 70601 - 6gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  45. Davis ME, Korn MA, Gumucio JP, Harning JA, Saripalli AL, Bedi A，等。辛伐他汀可减少纤维变性，防止大量肩袖撕裂后的肌肉无力。肩肘外科杂志，2015;24(2):280-7。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.jse.2014.06.048gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  46. Dillon JP, Laing AJ, Chandler JRS, Wang JH, McGuinness A, Redmond HP。普伐他汀减轻止血带所致骨骼肌缺血再灌注损伤。骨科学报。2006;77(1):27-32。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1080/17453670610045669gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  47. Péladeau C, Adam N, Bronicki LM, Coriati A, Thabet M, al - rewashdy H，等。在营养不良肌肉中靶向eEF1A2和上调utrophin A翻译的治疗方法的鉴定。自然通讯。2020;11(1):1990。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1038/s41467-020-15971-wgydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  48. 丁斯丽，李志强，李志强，等。全长utrophin的表达可预防mdx小鼠肌肉营养不良。自然医学。1998;4(12):1441-4。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1038/4033gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  49. Vetrone SA, Montecino-Rodriguez E, Kudryashova E, Kramerova I, Hoffman EP，刘sd，等。骨桥蛋白通过调节免疫细胞亚群和肌内tgf - β促进营养不良小鼠肌肉纤维化。中华临床医学杂志。2009;29(6):344 - 344。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1172/JCI37662gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba公共医学中心gydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  50. 仓冈M，木村E，永田T，冈田T，青木Y，大森H，等。血清骨桥蛋白作为杜氏肌营养不良患者肌肉再生的新生物标志物。中国生物医学工程学报。2016;26(5):529 - 529。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1016/j.ajpath.2016.01.002gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

  51. 他汀类药物的作用:从氧化还原调节到抑制血管壁炎症。中华血液病杂志，2012;29(5):344 - 344。gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1160/TH12-05-0337gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学者gydF4y2Ba

下载参考gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

我们要感谢雅盖隆大学生物化学、生物物理和生物技术医学生物技术系的同事们在Kraków上对所进行的实验提供的帮助:来自动物设施的Ewa Werner, Karolina Hajduk和Janusz Drebot，他们负责小鼠的护理和繁殖;感谢Meriem Taleb为C2C12细胞实验提供技术帮助，感谢行政人员(Agnieszka Andrychowicz-Róg和Joanna uchto - bajoeek)的帮助。此外，我们要感谢波兰科学团队TECH CORE FACILITY/2016-2/2生物制药质谱分析基金会——改进了药物定性、定量和结构表征的方法;蛋白质类药物靶点;诊断分子。gydF4y2Ba

资金gydF4y2Ba

这项工作得到了国家科学中心2016/21/B/NZ1/00293和2019/35/B/NZ3/02817(到AŁ)的资助。gydF4y2Ba

作者信息gydF4y2Ba

作者及隶属关系gydF4y2Ba

  1. 雅盖隆大学生物化学、生物物理和生物技术学院医学生物技术系，格罗诺斯塔霍瓦7,30 -387,Kraków，波兰gydF4y2Ba

    Olga Mucha, Paulina Podkalicka, Katarzyna Kaziród, Józef Dulak & Agnieszka ŁobodagydF4y2Ba

  2. 质谱仪实验室，生物化学和生物物理研究所，波兰科学院，华沙gydF4y2Ba

    伊米莉亚SamborowskagydF4y2Ba

作者gydF4y2Ba
  1. 奥尔加木栅gydF4y2Ba
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  2. Paulina PodkalickagydF4y2Ba
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  3. Katarzyna KazirodgydF4y2Ba
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  4. 伊米莉亚SamborowskagydF4y2Ba
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  5. 约瑟夫DulakgydF4y2Ba
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  6. 阿格涅斯卡ŁobodagydF4y2Ba
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贡献gydF4y2Ba

OMgydF4y2Ba进行研究，获取和分析数据，撰写第一版稿件;gydF4y2Ba页gydF4y2Ba进行研究，获取和分析数据，参与稿件撰写;gydF4y2Ba乐gydF4y2Ba进行研究，数据的获取和分析;gydF4y2Ba西文gydF4y2Ba进行药代动力学测定;gydF4y2BaJDgydF4y2Ba讨论资料，编辑稿件;gydF4y2Ba一个ŁgydF4y2Ba指导研究，设计研究，执行研究，解释数据，并参与手稿写作。作者们阅读并批准了最终的手稿。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba阿格涅斯卡ŁobodagydF4y2Ba．gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

伦理批准并同意参与gydF4y2Ba

所有动物实验均在波兰Kraków的第二届机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准(批准号:323/2018,301/2019,79/2021和170/2021)后，根据国家和欧洲立法进行。gydF4y2Ba

发表同意书gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者宣称他们之间没有利益冲突。gydF4y2Ba

额外的信息gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

伟德体育在线施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。gydF4y2Ba

补充信息gydF4y2Ba

附加文件1:gydF4y2Ba

补充图1。gydF4y2Ba辛伐他汀治疗不能改变横膈膜的炎症和纤维化gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠。(一)gydF4y2Ba苏木精-伊红(H&E)染色及炎症半定量分析代表图;比例尺:100 μm;均值±SEM;n = 4 - 6 /组。gydF4y2Ba(B)gydF4y2Ba不受辛伐他汀治疗影响的表达gydF4y2BaHmox1gydF4y2Ba基因，以均数±SEM表示;n = 10 - 13,存在。gydF4y2Ba(C)gydF4y2Ba马松三色染色和胶原沉积半定量分析的代表性照片显示辛伐他汀治疗动物的纤维化程度没有改变;比例尺:100 μm;n = 5 - 6 /组。gydF4y2Ba(D)gydF4y2Ba不受辛伐他汀治疗影响的表达gydF4y2BaSpp1gydF4y2Ba基因，以均数±SEM表示;gydF4y2BangydF4y2Ba= 10 - 13;中存在gydF4y2Ba(E)gydF4y2Ba．治疗后纤维化标志物表达不变:gydF4y2BaTgfb1 Mmp11,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaCol1a1gydF4y2Ba信使rna;n=12-13/组，虚线为WT水平;中存在。数据以均数±标准差表示。膈肌没有变化gydF4y2Ba(F)gydF4y2Ba截面积(CSA)gydF4y2Ba(G)gydF4y2Ba，肌肉纤维大小，以及gydF4y2Ba(H)gydF4y2Ba观察他汀类药物治疗组的CNF百分比gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠;gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 - 6;以均数±SEM表示;*为gydF4y2BamdxgydF4y2Ba辛伐他汀vs。gydF4y2BamdxgydF4y2Ba车辆及费用gydF4y2BamdxgydF4y2Ba整车与WT比较;＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05， **gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01， ***gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001， ****gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001,gydF4y2Ba＄gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,gydF4y2Ba$ $ $gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001,gydF4y2Ba$ $ $ $gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001。补充图2。gydF4y2Ba辛伐他汀gydF4y2Ba治疗gydF4y2Ba有gydF4y2Ba没有gydF4y2Ba影响gydF4y2Ba在gydF4y2Ba血管生成gydF4y2Ba标记gydF4y2Ba在gydF4y2Ba的gydF4y2Ba隔膜gydF4y2Ba肌肉gydF4y2Ba的gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠gydF4y2Ba．gydF4y2Ba(一)gydF4y2Ba与血管生成相关的mRNA水平下降gydF4y2BaVegfagydF4y2Ba在横膈膜肌中gydF4y2BamdxgydF4y2Ba老鼠没有变化gydF4y2BaKdr Ang1,gydF4y2Ba而且gydF4y2BaCxcl12gydF4y2Ba；n = 12 - 13 /组;以均数±SEM表示;以虚线表示的WT电平;中存在。未受影响的蛋白质水平gydF4y2Ba(B)gydF4y2BaVEGF,gydF4y2Ba(C)gydF4y2BaSDF-1,gydF4y2Ba(D)gydF4y2BaCD105在接受他汀类药物的动物横膈膜肌中的表达;n = 5 - 6 /组;ELISA，均数±SEM。gydF4y2Ba(E)gydF4y2Ba基于CD31/α-SMA双染色的血管定量分析和代表性照片显示，横膈膜肌明显加重gydF4y2BamdxgydF4y2Ba用辛伐他汀治疗的动物与对照组比较;n = 5 - 6 /组;以均数±SEM表示;比例尺:100 μm;＊gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05， ***gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001， ****gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001。补充图3。gydF4y2Ba辛伐他汀没有影响gydF4y2BaVegfagydF4y2Ba小鼠成肌细胞中的mRNA。gydF4y2Ba的表达gydF4y2BaVegfagydF4y2Ba辛伐他汀治疗后C2C12细胞系gydF4y2BangydF4y2Ba=6/组，用均值±SEM表示。gydF4y2Ba

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开放获取gydF4y2Ba本文遵循知识共享署名4.0国际许可协议，允许以任何媒介或格式使用、分享、改编、分发和复制，只要您对原作者和来源给予适当的署名，提供知识共享许可协议的链接，并注明是否有更改。本文中的图像或其他第三方材料包含在文章的创作共用许可协议中，除非在材料的信用额度中另有说明。如果材料未包含在文章的创作共用许可协议中，并且您的预期使用不被法定法规所允许或超出了允许的使用范围，您将需要直接获得版权所有者的许可。如欲查看本牌照的副本，请浏览gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba．创作共用公共领域奉献弃权书(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba)适用于本条所提供的资料，除非在资料的信用额度中另有说明。gydF4y2Ba

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穆夏，O.，波德卡利卡，P.， Kaziród, K。gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba辛伐他汀不能减轻杜氏肌营养不良小鼠模型的肌肉病理。gydF4y2Ba骨骼肌gydF4y2Ba11gydF4y2Ba， 21(2021)。https://doi.org/10.1186/s13395-021-00276-3gydF4y2Ba

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  • 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂gydF4y2Ba
  • 辛伐他汀gydF4y2Ba
  • DMDgydF4y2Ba
  • 杜氏肌营养不良症gydF4y2Ba
  • 血管生成gydF4y2Ba
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