欧洲野猫的心肺寄生虫(猫属silvestri)在德国

背景

在过去的几年里，对猫科动物心肺寄生虫的研究在欧洲大大增加。不仅仅是家猫(家猫)，但也有欧洲野猫(猫属silvestri)可以作为这些线虫的最终宿主。的f . silvestri在过去的几十年里，德国的人口一直在迅速增长;因此，评估其心肺寄生虫状态对于揭示野猫种群是否作为这些线虫的重要储存库以及是否可能对家猫构成健康威胁具有重要意义。

方法

作为德国联邦莱茵兰-普法尔茨州欧洲野猫自然保护项目的一部分，肺部(n= 128)和红心(n= 111)的128f . silvestri对发现的死者进行了心肺寄生虫检查。对所有分离的寄生虫进行形态鉴定，并对每种寄生虫3 ~ 11个标本进行分子分析。

结果

共有70.3%(90/128)野猫至少检出一种肺虫。摘要chabaudi最常见(53.1%[68/128])，其次是Aelurostrongylus abstrusus(42.2% [54/128]),Troglostrongylus brevior(31.3% [40/128])Capillaria(3.1%[4/128])。值得注意的是，大约三分之二的被感染的野猫有共同感染。每只野猫的感染强度从1到167个线虫不等。广义线性模型揭示了两者之间的强相关性答:chabaudi和答:abstrusus成年野猫的感染率和患病率高于年轻野猫，除了t . brevior。此外,t . brevior发病率因营养状况而有显著差异。

结论

这项研究表明，猫科心肺线虫在德国的欧洲野猫中是常见的寄生虫，但似乎对种群的整体健康没有严重影响。由于假定通过猎物发生溢出事件，心肺线虫可能在野猫种群和家猫之间传播，因此可能对家猫个体构成健康风险。

图形抽象

欧洲野猫的数量(猫属silvestri)在过去一直遭受栖息地的破坏和破碎，以及狩猎，导致它们在20世纪初几乎灭绝。因此，自1922年以来，建立了许多保护措施，使人口得以恢复，直到今天[1]．尽管在2021年被列为世界自然保护联盟濒危物种红色名录中最不受关注[2]，欧洲野猫仍属于德国严格保护物种(《联邦自然保护法》第7(2)条第14句)，Bundesnaturschutzgesetz［3.];理事会指令92/43/EEC，附件IV [4])。在德国的红色名单[5]，f . silvestri被列为濒危物种(相当于世界自然保护联盟红色名录中的脆弱物种)，尽管各种自然保育项目，例如德国环境与自然保育联合会、德国地球之友(Bund fuer umwelund naturschtz deutschz, Bund)，近几十年来一直在推动它在德国重新出现。作为这些项目的一部分，保护措施有助于保护和增加欧洲野猫的数量。

野生食肉动物，如f . silvestri，通常是多种寄生虫的宿主，这些寄生虫可能对人口的健康产生有害影响，或可传播给家畜和人类。因此，根据“同一个健康”概念，寄生虫监测对于评估进一步保护措施的必要性和估计对国内和共生周期产生溢出事件的风险非常重要。至于寄生虫，心肺线虫可能对欧洲野猫和家猫的健康构成威胁(家猫）.

猫特有的转圆形细胞Aelurostrongylus abstrusus，Troglostrongylus brevior和摘要chabaudi在心肺系统安定下来。生命周期答:abstrusus和t . brevior与猫科终宿主通过粪便排泄的第一阶段幼虫(L1)表现出相似的特征。各种腹足类动物，如蛞蝓，作为第三阶段幼虫(L3)发育的中间宿主[6]．最终的猫科宿主通过吞食中间宿主，或者更有可能的是吞食副宿主，如小型啮齿动物、鸟类或其他脊椎动物，而摄入具有传染性的L3 [7，8，9]．此外，潜在的乳源性传播t . brevior对后代的影响已经在家猫身上得到了体现[10，11]．相比之下,答:chabaudi研究较少;因此，它的生命周期在很大程度上仍然未知。然而，它被假设与其他转圆类类似，L1通过粪便排泄，并在腹足类动物中作为中间宿主进一步发展[12]．成年变圆样细胞的大小不同，表明它们在最终宿主的肺和/或心脏中的定位。成人答:abstrusus是猫科动物中最小的普通转圆体，长5-10 mm，宽60-80µm [13]，栖息在肺泡导管和细支气管中[14]．成人T。brevior较大(长5 - 13mm，宽0.3-0.4 mm)，分布于支气管和细支气管[13]，而成人答:chabaudi(长14-22毫米，宽0.2-0.3毫米[12])位于其最终宿主的右心脏和肺动脉[15]．

三角线虫Capillaria aerophila(syn。Eucoleus aerophilus)是猫科动物另一种重要的肺虫。与转圆形细胞不同，卵子通过粪便排泄到环境中，在那里，具有传染性的L1在卵子内发育。野猫可以通过摄入具有传染性的虫卵或蚯蚓而感染，这些虫卵或蚯蚓被怀疑是兼性中间或副病原宿主[16]．成虫，长20-30毫米，宽60-180微米[17]，位于较大的气管(即气管、支气管和细支气管)的粘膜下[18]．

而肺虫的发生在f . silvestri在其他欧洲国家，主要是意大利、希腊和罗马尼亚进行了很好的研究[19，20.，21，22，23]，对其在德国的流行情况了解有限。在德国之前的两项研究中，上述肺蠕虫已经在f . silvestri［24，25]，证明在德国的欧洲野猫身上存在各种心肺寄生虫。然而，这些先前研究的样本量相当低(分别为5只和15只野猫)，因此尚未获得这些寄生虫流行率的代表性数据。因此，本研究的目的是调查的心肺寄生虫f . silvestri以获得感染范围和强度的全面情况，这有助于评估野猫作为家猫肺虫储存库的潜在作用。

欧洲野猫样本

128具尸体f . silvestri可从“莱茵兰-普法尔茨州野猫死亡监测”(为监测莱茵-法尔茨州的Wildkatze提供资金)“由德国环境与自然保护联合会、德国地球之友、莱茵兰-普法尔茨州协会执行[Bund fuer Umwelt and Naturschutz deutschz（外滩)，Landesverband Rheinland-Pfalz]．2018年至2020年，德国联邦莱茵兰-普法尔茨州的公民发现了这些死亡的标本，并向BUND报告，由志愿者收集(图2)。1）.解剖工作由BUND及其合作机构Will and Liselott Masgeik Foundation、OEKO-LOG实地研究以及鸟类、爬行动物、两栖动物和鱼类诊所、Justus-Liebig-University Giessen进行[26]．这个物种f . silvestri经形态计量学和遗传(减少单核苷酸多态性)面板验证[27])先前报告的检查[26]．在解剖过程中，我们评估了不同的参数，如性别、年龄、营养状况和分解状态，作为BUND项目的一部分[26]．在本研究中，根据Leonhardt等人所描述的不同脂肪沉积，对营养状况进行了分类。[26:如果没有皮下脂肪和内脏脂肪以及肾脏或冠状动脉脂肪，野猫被归类为“非常糟糕”的营养状况。此外，由于缺少一些野猫的冠状动脉脂肪数据，因此总结了“非常糟糕”和“病态”的因素。分类方案见附加文件1。在128具尸体中，128具肺和111具心脏保存在- 20°C，以待寄生虫学检查。

心肺寄生虫的筛选及形态学鉴定

在7倍放大(SLX-2)下，用剪刀切开解冻后的心、肺的心室、心房、外血管以及气管、主、副支气管和大血管;OPTIKA S.r.l, Ponteranica, Italy)用于检测寄生寄生虫。随后，将肺切成小块(最大3-4 mm)，用显微镜载玻片挤压到培养皿中，在12.5倍放大镜(SLX-2;OPTIKA S.r.l, Ponteranica, Italy)。检测到的寄生虫如图所示。2被分离和计数，然后是属，如果可能的话，根据形态特征进行种鉴定[8，12，13，28，29，30.]．

心肺寄生虫的分子种类鉴定

为了确认形态种的确定，每个检测种共提取3-11个标本进行DNA提取。用杵破坏全部或部分寄生虫，用90µl的DirectPCR裂解试剂(DirectPCR)裂解^®细胞裂解试剂;Viagen Biotech Inc, Los Angeles, CA, USA)和10µl Proteinase K (20 mg/ml;machery - nagel GmbH & Co. KG, Dueren, Germany)答:chabaudi和t . brevior小一点的是每个体积的一半答:abstrusus和Capillaria物种。样品在55°C下孵育14-16 h，然后在85°C下孵育45 min以灭活蛋白酶k答:abstrusus，t . brevior和答:chabaudi在25µl的反应装置中，含有0.5µl DreamTaq DNA聚合酶(5.0 U/µl)， 2.5µl 10x DreamTaq缓冲液(Thermo Fisher Scientific Inc.， Waltham, MA, USA)和0.5µl dNTPs(每个10 mM);烤肉^®-Mix PCR 3, Carl Roth GmbH+CoKG，卡尔斯鲁厄，德国)。对于分子的确认Capillaria细胞色素c氧化酶亚基1 (Cox 1)和18S rRNA基因扩增，用0.25µl DreamTaq DNA聚合酶、5.0µl 10× DreamTaq缓冲液和1.0µl dNTPs，反应体积为50µl。引物、模板和循环条件的详细信息见表1。

在GelRed上显示扩增^®补充(1:10,000;Biotium, Inc.， Fremont, CA, USA) 1.5%琼脂糖凝胶，预期大小的PCR产物是定制的Sanger测序(Microsynth Seqlab GmbH, Goettingen, Germany)。获得的序列在NCBI标准数据库中进行blast，随后与Clone Manager (Version 9 Professional, Sci-Ed, Westminster, CO, USA)中选定的已发表参考序列进行比对。本研究生成的序列存储在GenBank中，登录号为OP452826-OP452827 (答:abstrusus)， op452837-op452839 (t . brevior), OP452828-OP452836（答:chabaudi)和OP454031-OP454034以及OP453093-OP453095 (Capillariaspp)。

统计分析

采用R 4.1.0版本进行统计分析[31]．对于每种寄生虫的流行率，采用R函数“二项检验”确定95%置信区间。采用二项误差结构的广义线性模型(GLMs)来评估预测变量“性别”、“年龄”、“营养状况”、“发现月份”和“分解状态”对后圆样细胞患病率的影响答:abstrusus，答:chabaudi和t . brevior。为了进行合适的分析，分别将预测变量“营养状况”和“分解状态”的“非常好”和“好”以及“坏”和“非常坏/恶病质”因素与“中等新鲜”和“中等腐烂”因素结合起来。此外，其他两种转移淋巴细胞的感染也被作为预测因素。因为只有四只猫感染了Capillariaspp。这种寄生虫没有被单独考虑。然而,Capillariaspp感染被纳入进一步的模型，评估上述预测因子(除合并感染外)对“心肺寄生虫总感染”的影响。由于缺少数据，对103只野猫的子集进行了模型计算。使用似然比检验将每个GLM与仅包含截距的空模型进行比较。

研究的欧洲野猫的关键参数

本研究可获得的所有欧洲野猫均来自德国联邦莱茵兰-普法尔茨州，采样点位于普法尔茨州(48.4%)、Hunsrueck(19.5%)、Westerwald(9.4%)、Eifel(14.8%)和Taunus(3.1%)。1）.而被检查的127只野猫在形态上或基因上被确定为f . silvestri一个是两者的杂交f . silvestri和f·卡图斯。被研究动物的数据见表2由BUND收集，部分由合作机构在解剖过程中收集。由于持续腐烂或尸体不完整，14只野猫(10.9%)无法确定性别[26];男性68人(53.1%)，女性46人(35.9%)。年龄测定以成年野猫为主(> 25月龄，占53.9%)，营养状况为极好或良好(占62.5%)。以秋季为主，分别为9月(13.3%)、10月(9.4%)和11月(20.3%)。尸体的腐烂状态主要为中度新鲜或中度腐烂(59.4%)，主要死因为创伤(93.8%)，主要原因是道路交通事故。

肺和心脏的检查

总共有70.3%的野猫携带心肺寄生虫。检测到四种不同的线虫，分别为答:chabaudi代表最常见的物种(53.1%)，其次是答:abstrusus(42.2%)和t . brevior(31.3%),Capillaria种相当罕见(3.1%)。详细数据如表所示3.代表性标本如图所示。3.和附加文件2。Aelurostrongylus abstrusus主要在挤压肺片中检测到，因为它们牢固地附着在肺组织上。除了一般体型较小外，雄性的滑囊较小，针状体较短，雌性的肛门与外阴之间的距离较短(图2)。3.B, C) than答:chabaudi(无花果。3.H, I)。摘要chabaudi不仅在挤压时出现，而且在肺大血管打开时也经常出现。的前端答:chabaudi携带典型的头囊泡(图2)。3.G)，这是在答:abstrusus(无花果。3.时)。答:abstrusus，t . brevior和Capillaria仅在肺中检测到;答:chabaudi在心脏中也有发现(20.7%)，如图所示。4。20.6%(14/68)的人答:chabaudi阳性野猫两器官均检出蛔虫，66.2%(45/68)只检出肺内蛔虫，13.2%(9/68)只检出心内蛔虫。12答:chabaudi由于野猫阳性，心脏无法进行检查。此外，20个肺和23个心脏不完整，因此只能部分检查。然而，对患病率的影响很小，至少在肺部(部分肺:70.0% [14/20]vs.全肺:70.4% [76/108];部分心脏:13.0% [3/23]vs.完整心脏:22.7%[20/88])。

总的来说，35.6%(32/90)的阳性野猫是单一感染答:abstrusus(8.9% [8/90]),t . brevior(10.0%[9/90])或答:chabaudi(16.7%[15/90])。64.4%(58/90)的野猫共感染多达三种不同的肺虫(表2)3.）.Aelurostrongylus abstrusus和答:chabaudi双重感染检出率最高(25.6%[23/90])，其次是t . brevior和答:chabaudi(12.2% [11/90]),答:abstrusus和t . brevior(5.6%[5/90])和答:chabaudi和Capillaria(1.1%[1/90])。观察到三次感染答:abstrusus，t . brevior和答:chabaudi(16.7% [15/90])答:abstrusus，答:chabaudi和Capillaria(3.3%[3/90])。

每只野猫的感染强度为1 ~ 167个心肺线虫，其中1 ~ 167个答:abstrusus， 1-26的t . brevior， 1-58的答:chabaudi和一个Capillaria每个标本。关于感染强度的更详细数据见表3.和无花果。5。

分子物种鉴定

PCR循环和Sanger测序结果表明，每个种属3-11条虫的序列质量为2条答:abstrusus,三个t . brevior, 9答:chabaudi和四个Capillaria标本(4× 18S rRNA扩增子;3× Cox 1扩增子)。序列比较答:abstrusus，t . brevior和答:chabaudi扩增子与NCBI GenBank [acc]中公布的ITS序列的一致性为99.4-100%(查询覆盖率:100%)。编号KX518353 (答:abstrusus)、km506759 (t . brevior)， km979214 (答:chabaudi)]。得到的18S rRNACapillariaSpp.序列显示100%的同一性(查询覆盖率:100%)c . aerophila从瑞士和意大利的红狐中分离出来。编号:JX411622-JX411631)和99.8%的一致性(查询覆盖率:100%)Capillaria boehmi来自红狐(Vulpes Vulpes)在意大利(acc。号KC341986-KC341987)。三组接受的Cox 1 mtDNA序列存在1 - 4个核苷酸的差异。他们显示了98.5-100%的一致性(查询覆盖率:100%)Capillariasp.序列来源于澳大利亚猫的支气管肺泡灌洗液(acc。不。MH665363)， 83.8-85.3%的一致性(查询覆盖率:100%)c . aerophila源自瑞士和意大利的红狐。编号:KC341988-KC341991)， 83.5-85.1%与c . aerophila源自意大利的猫和狗。编号:JQ905052-JQ905059)与82.5-85.5%的一致性(查询覆盖率:100%)c . boehmi来自意大利和挪威的红狐和狗。编号KC341992, KR186213-KR186215)。稍低的恒等式Capillaria gastrica源自澳大利亚沼泽鼠(鼠属lutreolus)在塔斯马尼亚(81.3-82.0%，查询覆盖率:100%，acc。不。AJ288163)和Capillaria属的植物源自一种欧洲水鼠(Arvicola terrestris)(80.8-81.6%，查询覆盖率:100%，acc。不。发现了KC355434)。

总体而言，分子物种鉴定证实了物种(答:abstrusus，t . brevior，答:chabaudi)或属水平(Capillariaspp)。

统计分析

在glm分析的103个子集中，每个预测变量的每种心肺寄生虫的个体患病率、总感染和共感染f . silvestri列在附加文件1。模型显示了显著的关联答:abstrusus和答:chabaudi感染(表4）.事实上，动物感染了答:abstrusus有大约5倍的几率也有窝藏答:chabaudi(反之亦然)答:abstrusus消极的动物。此外，年龄的显著影响答:abstrusus和t . brevior(表4)以及心肺寄生虫感染总数(表2)5）.成人总患病率(84.9%[45/53])高于亚成人(58.8% [10/17]);P= 0.045)和幼年个体(28.6% [2/7];P= 0.009)答:abstrusus成人(56.6%[30/53])明显高于亚成人(17.6% [3/17]);P= 0.022)。相比之下,t . brevior未成熟者多见(50.0% [13/26];P= 0.012)，高于成年野猫(34.0%[18/53])。此外，t . brevior男性患病率较高，为38.7 [24/62];P= 0.030)高于雌性(29.3%[12/41])和营养不良/恶病质动物(66.7% [6/9]);P= 0.014)，较“非常好/良好”(36.2%[25/69])为高。此外，发现分解状态对总心肺寄生虫感染的检测有显著影响答:abstrusus和t . brevior。新鲜野猫的总感染率(87.1%[27/31])明显高于处理过的腐烂野猫(42.9% [3/7]);P= 0.023)。检测答:abstrusus新鲜尸体(67.7%[21/31])比中度新鲜/中度腐烂尸体(35.4%[23/65])更常见;P= 0.017)。相比之下,t . brevior在中度新鲜/中度腐烂中检出率更高(38.5% [25/65];P= 0.019)，高于新鲜动物(25.8%[8/31])。

在比较发现的月份时，没有发现统计学上显著的季节差异。

几乎四分之三的野猫(70.3%)感染了至少一种心肺线虫，证实了先前关于存在的报告答:abstrusus，T. brevior, A. chabaudi和Capillaria种虫害的f . silvestri在德国[24，25]．

在欧洲，不同研究中肺虫种类的流行率各不相同。而目前的研究显示42.2%的患病率为答:abstrusus， Steeb [25组织学检查的85例肺中有27例(31.8%)检出线虫分期f . silvestri来自德国和卢森堡不同地区，其中21只(24.7%)感染了幼虫期答:abstrusus。在希腊，感染流行率与死猫的43.5%相当[22]，而罗马尼亚的患病率较低，为4.3% [23]．在意大利，患病率为0.0至62.5% [19，20.]．意大利患病率的高差异和罗马尼亚患病率的低差异可以用方法差异来解释。Veronesi等。[20.]用钳子解剖受损肺组织，占62.5%答:abstrusus-阳性肺，而Falsone等。[19]和Deak等人。[23]检查了挤压肺组织的冲洗，没有或只有低检测到答:abstrusus,分别。

虽然t . brevior已经在德国的欧洲野猫身上发现，目前还没有关于其流行程度的数据[25]．的t . brevior在本研究中发现的流行率为31.3%，高于预期，因为这种寄生虫以前被认为在南欧而不是北欧国家发挥更重要的作用[32]．在南欧，观察到的患病率较低、相似或更高，范围在14.9%至71.4%之间f . silvestri分别在罗马尼亚、希腊和意大利[19，20.，22，23]．在家猫中，根据粪便检查，保加利亚、西班牙和意大利各地区的发病率较低，为1.4-14.2% [33]．当前研究中发现的相当高的患病率可能是由于近年来气候变化导致德国的发病率增加t . brevior在22-27°C的中间宿主中发育最快，例如Helicellaspp。7]．此外，分布不断增加t . brevior它的天然宿主，即f . silvestri，可能与这种寄生虫的发生呈正相关[34]．另一个可能的假设是t . brevior可能已经在德国流行了较长时间，但在家猫的常规粪便诊断中通常被误诊，可能主要是在临床环境中，因为L1与的高度相似答:abstrusus［8，16]．

与其他猫科心肺线虫相比，答:chabaudi已经被忽视很久了。在欧洲野猫首次被描述后的50多年[15]， 2014年，这种寄生虫在意大利的一只家猫身上被“重新发现”[35]．此后，在罗马尼亚和波斯尼亚和黑塞哥维那又报告了感染野猫的病例[36，37]．此外，意大利、罗马尼亚和希腊解剖野猫的患病率分别为6.3-56.5% [20.，22，23]．本研究确定的53.1%的患病率可能被略微低估，因为5只野猫的心脏呈阴性答:chabaudi他们的肺部无法进行检查。然而，流行率与希腊相似，高于意大利。在现在和希腊的研究中[22]，答:chabaudi最常见的心肺寄生虫是否比其更为人所知的亲戚更容易被检测到答:abstrusus。由于其频繁发生，应引起更多的重视答:chabaudi，并需要进一步研究其生命周期，以揭示野猫(和家猫)的潜在传播周期[35，38])及其致病性。

确定的患病率Capillaria被测野猫的spp为3.1%。相比之下，Krone等人[24)检测c . aerophila13.3% (2/15)f . silvestri来自德国联邦州北莱茵-威斯特伐利亚州，莱茵兰-普法尔茨州和萨尔州。在意大利、希腊和罗马尼亚，c . aerophila患病率介乎18.8%至34.0% [19，20.，22，23]．本研究中患病率低的一个可能解释是检查方法，其中额外冲洗打开的气管和支气管可能导致更高的恢复Capillaria粘膜标本可能被遗漏。

不幸的是，物种鉴定Capillaria对18S rRNA和Cox 1扩增子进行测序是不可行的。而18S rRNA表现出高度的保守性，从而可以可靠地确定属[39]，线粒体Cox 1基因具有很高的种内多态性C。aerophila在意大利，有8只狗和猫被隔离c . aerophila单倍型差异在0.4 ~ 5.5%之间[18]．本研究得到的三个Cox 1序列与上述序列相差14.9 ~ 16.5%c . aerophila序列，表明发现CapillariaSp.即使不是一个新物种，至少也代表了一个新的单倍型。这种寄生虫在世界范围内的广泛传播和不同宿主的广泛分布，包括猫、狗和许多不同的野生哺乳动物，这可以解释高度多样化的单倍型的存在。不幸的是，单倍型c . aerophila在欧洲的野猫和家猫中都是未知的，除了意大利[18，20.]．然而，观察到较高的遗传距离c . aerophila，可与…相比c . boehmi而是暗示这里发现的物种不是c . aerophila。Capillaria boehmi，另一种低宿主特异性的毛细血管[40]发生在食肉动物(主要是狐狸、鼬和狗)呼吸道中的[41])，不仅由于其低核苷酸特性而被推迟，而且由于其在宿主体内的特异性定位而被排除在外[40]．而c . boehmi寄生于上呼吸道，即鼻腔和鼻窦[41),Capillaria本研究的标本仅在气管和支气管中检测到。有趣的是，这些检测到的标本显示出高度的Cox 1核苷酸同源性(98.5-100%)Capillaria澳大利亚猫标本(GenBank acc.)。不。MH665363)，值得进一步调查。

大约三分之一的受感染野猫表现为单一感染，而大约三分之二的野猫携带两种或三种心肺线虫。最常见的合并感染是答:abstrusus和答:chabaudi这影响了大约四分之一的阳性野猫。因此，无论是单次感染还是合并感染，这种感染也是最常见的。第二常见的感染是单次感染答:chabaudi还有三重感染答:abstrusus，答:chabaudi和t . brevior，各占同等比例。然而，不像共感染答:abstrusus和答:chabaudi，这些没有统计学上的显著相关。在意大利和罗马尼亚的其他研究中，2-4种不同物种的共同感染约占所有感染的三分之一。最常见的共感染是答:abstrusus和t . brevior和答:chabaudi和c . aerophila在20.0%和13.8%的阳性动物中[20.，23]．

除了共同感染外，感染的强度可对野生动物种群的健康产生各种影响[42]．在这项研究中，感染强度从单个到多达167个标本不等。然而，在大多数情况下，野猫只受到每种寄生虫的几个样本的轻微感染。然而，必须考虑到实验因素可能导致感染强度低，例如部分腐烂的蠕虫检测有限或由于分解而完全丢失。此外,答:chabaudi在12只肺呈阳性但没有心脏可检查的动物中，强度可能更高。然而，也有其他研究报告了相对较低的感染强度，只有3t . brevior在罗马尼亚野猫身上发现的个体[43]和9-12答:chabaudi在f . silvestri源自波斯尼亚及黑塞哥维那、希腊及罗马尼亚[12，36，37]．

寄生虫在野生动物中的流行受许多因素的影响[42]．在本研究中，样本条件作为一个间接因素和所有被测试的内在因素(性别、年龄、营养状况)影响至少一种心肺线虫的流行，而外在因素“发现月份”没有影响。的患病率明显较高答:abstrusus而总心肺线虫在新鲜或腐烂的尸体中比在中度新鲜或腐烂的尸体中分解的寄生虫要少，具有很薄的体积答:abstrusus特别是变得具有溶解性，因此难以检测。相比之下,t . brevior在中度新鲜/中度腐烂个体中检测到的频率明显高于在新鲜个体中检测到的频率，这表明宿主组织的轻度分解不会影响对较大寄生虫的检测。

在内在因素方面，显著增高t . brevior雄性野猫的患病率高于雌性野猫，可能是由于睾酮的免疫抑制作用[44或行为差异。与女性相比f . silvestri，雄性需要更多的猎物，因为它们的体型和活动范围更大，猎物范围也更广[45，使他们更有可能有更高的感染率。然而，在其他寄生虫种类中没有观察到较高的雄性感染率，这表明雌性寄生虫的性别依赖性t . brevior可能是随机效应。此外，经常有报道称，在怀孕和哺乳期受到免疫抑制等因素的影响，不仅会发生偏向雄性的寄生，也会发生偏向雌性的寄生;因此，性别对寄生虫感染的影响经常引起争议[46]．寄主年龄对其患病率有显著影响答:abstrusus总的心肺寄生虫感染，这在成年野猫中比在年轻的群体中更常见。这一观察结果已被报道过答:abstrusus在家猫中[47]．观察到的年龄依赖性相反t . brevior感染，未成熟(5-10个月)的动物明显比成年(> 25个月)更容易感染。在意大利，对家猫进行了同样的观察，年龄较小的个体(分别≤6个月和< 1岁)比年龄较大的猫更容易受到感染[48，49]．年龄依赖性可能是由不同寄生虫的寿命和对不同寄生虫的免疫力所介导的。对实验感染的家猫的临床研究表明，感染答:abstrusus持续至少25周[50]，而感染t . brevior6-9周后开始消退[51]．的长寿命答:abstrusus潜在的阻碍免疫力的发展可能有利于这种寄生虫在宿主体内的积累，而短暂的寿命t . brevior并且假定有效免疫的发展抵消了积累和再感染，从而限制了其主要发生在幼龄动物中。虽然家猫和野猫的寄生虫寿命和/或免疫反应可能不同，但营养状况的影响与寄生虫感染率呈负相关t . brevior研究结果也支持了这一假设，即处于不良/病态状态的动物比处于良好/非常良好状态的动物更容易被感染。例如，由于免疫反应减弱，恶劣的条件可能有利于寄生虫持续存在，而寄生虫感染本身可能导致身体状况恶化，例如通过破坏宿主组织[42，52]．为了证实这一假设，需要进一步研究猫对心肺线虫感染的免疫。

不幸的是，很难将寄生虫感染强度与野猫的健康状况联系起来，因为无法进行进一步的检查，而且只有很少的比较数据可用。单只或共感染野猫的组织学肺部检查显示轻度至重度肺部病变和(支气管)肺炎归因于答:abstrusus，t . brevior和/或答:chabaudi［20.，37]．受感染的动物也可能遭受临床痛苦，如野猫感染答:abstrusus，t . brevior，答:chabaudi和c . aerophila，入院时一般情况很差，有呼吸道症状，x光片显示肺部有严重病变[53]．这类报告虽然罕见，但证明了心肺寄生虫对单个欧洲野猫健康的潜在影响，特别是当动物遭受合并感染时，与单一感染相比，可能表现出更高的致病性[54]．然而，在目前的研究中，大约三分之二的感染野猫同时感染了两到三种心肺线虫，但只有一小部分处于不良或恶病质状态，这表明这种多重感染通常不会导致健康状况不佳，其他因素也会导致这种状况。

虽然对野猫的了解相当贫乏，但对家猫肺虫感染的临床影响的描述更为全面。在这些,答:abstrusus和t . brevior会引起严重的呼吸道症状吗t . brevior特别是小猫的感染可能是致命的[11，13，55，56]．感染c . aerophila也可能导致支气管疾病，包括咳嗽和喘息[14]．相比之下，……的效果答:chabaudi迄今为止，尚无家猫感染病例。在两例已发表的病例中，其中一例未报告对被道路撞死的猫进行病理组织学检查[35在另一种情况下，这只猫患有混合感染答:abstrusus和t . brevior［57]．这只猫的尸检显示严重呼吸窘迫，入院后不久死亡，没有发现与猫血管线虫病一致的寄生虫学或病理学发现。然而，没有结论关于(缺乏)致病潜力答:chabaudi在家猫中，可从仅检测到两种成年线虫的病例中提取。因此，家猫的潜在出现会对健康造成不可预测的影响[38]．

总体而言，在野生动物与家养动物的交界面存在猫科心肺寄生虫外溢的风险。不同的寄生虫不仅有相同的中间宿主和副宿主，例如小型啮齿动物、鸟类和其他脊椎动物[7，8，9]，但这些寄主，尤其是小型啮齿动物，也是野猫和家猫的猎物。因此，可以假设从欧洲野猫到家猫的间接传播，反之亦然[20.，24，34]．本研究中观察到的野猫中心肺线虫的高流行率可能有利于它们间接传播给家猫，并构成严重的健康威胁;因此，应提高家猫对肺虫感染的认识。

四种不同的心肺寄生虫在f . silvestri在德国。而后圆样细胞答:abstrusus，t . brevior和答:chabaudi出现在三分之一到二分之一的野猫身上Capillariasp不太常见，患病率仅为3%左右。摘要chabaudi是最常见的心肺线虫，但研究最少，其生命周期和致病性有待于进一步的研究。此外，我们的研究表明，积累答:abstrusus成年野猫的感染t . brevior在未成年人中比在成人中更容易被发现。这可能表明，一方面，缺乏或不充分的免疫发展，另一方面，相当有效的免疫，这需要进一步研究猫对心肺线虫感染的免疫。此外，还应注意共感染的流行病学和健康影响，共感染约占感染的三分之二。心肺线虫对个体野猫健康的影响很难从我们的研究中评估，该研究检查了死亡的发现动物。尽管如此，由于大多数野猫的营养状况良好或非常好，因此它们似乎都很健康，因此心肺线虫感染似乎在德国野猫种群的整体健康状况中只起很小的作用。然而，由于假定对家猫的溢出，兽医应更加注意这些寄生虫，并将其视为有心肺症状的猫的鉴别诊断。

支持报告结果的数据包含在文章及其附加文件中。生成的序列保存在GenBank中，登录号为OP452826-OP452827 (答:abstrusus)， op452837-op452839 (t . brevior)， op452828-op452836 (答:chabaudi)及OP454031-OP454034及OP453093-OP453095 (Capillariaspp)。

爆炸:

基本的局部对齐搜索工具

外滩:

Bund fuer Umwelt and Naturschutz deutschz

考克斯1:

细胞色素c氧化酶亚基1

背景:

脱氧核糖核酸

核苷酸:

Deoxynucleotide三磷酸腺苷

全球语言监测机构:

广义线性模型

其:

内部转录间隔

世界自然保护联盟:

国际自然保护联盟

L1:

一期幼虫

L3:

三级幼虫

mtDNA:

线粒体DNA

NCBI:

国家生物技术信息中心

聚合酶链反应:

聚合酶链反应

RNA:

核糖核酸

核糖体rna:

核糖体核糖核酸

作者感谢BUND Rhineland-Palatinate的Ines Leonhardt提供了表中显示的wildcat关键数据2。此外，我们还要感谢吉森大学鸟类、爬行动物、两栖动物和鱼类诊所的Eva Marie famira - parsetich、Katharina Mareike Westhoff和Saskia Nemitz解剖了部分动物并提供了样品材料，以及Vera Felten、Munia Gölner、Diana Minten和Malte Pitters提供的技术援助。

这项工作得到了莱茵兰-普法尔茨环境、能源、食品和林业部的财政支持[部长部门环境、能源、Ernährung和莱茵-普法尔茨（MUEEF));由德国环境与自然保护联合会、德国地球之友、莱茵兰-普法尔茨州协会执行[Bund fuer Umwelt and Naturschutz deutschz（外滩)，Landesverband Rheinland-Pfalz]作为项目管理组织。本开放获取出版物由德国研究基金会(DFG) -491094227“开放获取出版物基金”和汉诺威兽医大学基金会资助。

作者及单位

1. 汉诺威兽医大学感染医学中心寄生虫学研究所，布恩蒂韦格17,30559，德国汉诺威

   Katrin Bisterfeld, Marie-Kristin Raulf, Patrick Waindok, Andrea Springer和Christina Strube

2. 汉诺威兽医大学陆生和水生野生动物研究所，Werftstrasse 6, 25761，德国Buesum

   卡特琳·比斯特菲尔德和厄休拉·希伯特

3. 德国吉森市李比希大学鸟类、爬行动物、两栖动物和鱼类诊所，法兰克福大街114号，35392

   Johannes Lang & Michael Lierz

贡献

US和CS构思和设计实验并管理项目。JL和ML负责收集一部分动物的样本。JL, ML和US获得了资金。KB进行了所有的寄生虫学检查和分子工作，分析了数据，并在US和CS的监督下撰写了手稿的初稿。PW对分子分析做出了贡献。AS对统计分析做出了贡献。MKR、AS和CS参与数据评价。MKR、PW、AS、JL、ML、US、CS编辑修改稿件初稿。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。

相应的作者

对应到克里斯蒂娜Strube。

伦理批准并同意参与

在这项研究中检查的肺和心脏来自于尸体f . silvestri在“莱茵兰-普法尔茨州野猫死亡监测”(为监测莱茵-法尔茨州的Wildkatze提供资金)“德国环境与自然保护联合会、德国地球之友、莱茵兰-普法尔茨州协会[Bund fuer Umwelt and Naturschutz deutschz（外滩)，Landesverband Rheinland-Pfalz]．收集发现的尸体f . silvestri已获负责的自然护理机构批准[26]．

发表同意书

不适用。

相互竞争的利益

作者宣称他们没有竞争利益。

出版商的注意

伟德体育在线施普林格·自然对已出版的地图和机构关系中的管辖权要求保持中立。

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