不同品种的健康犬、健康迷你雪纳瑞犬和患有高脂血症的迷你雪纳瑞犬的新脂蛋白密度图谱gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

尽管脂蛋白代谢异常在犬类临床医学中的重要性，但之前使用的大多数脂蛋白图谱分析方法都相当费力和耗时，这一直是脂蛋白图谱分析在犬类中广泛临床应用和使用的主要障碍。本研究的目的是评估在乙二胺四乙酸铋钠(NaBiEDTA)密度梯度中产生的连续脂蛋白密度图谱(CLPDP)的可行性，以表征和比较各种品种的健康犬、健康迷你雪纳瑞犬和原发性高三酰基甘油血症的迷你雪纳瑞犬的脂蛋白图谱。选择血清三酰甘油(TAG)和胆固醇浓度在各自参考区间内的各品种健康犬35只作为参考群体。31只血清TAG和胆固醇浓度在各自参考区间内的迷你雪纳瑞犬和31只患有高三酰甘油血症的迷你雪纳瑞犬也纳入了研究。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

结果表明，使用NaBiEDTA的CLPDP除了测量血清TAG和胆固醇浓度外，还提供了独特的诊断信息，它是一种有用的筛查方法，用于疑似脂蛋白代谢障碍的狗。使用CLPDP提供的详细和连续的密度分布信息，即使在血清TAG和胆固醇浓度在参考区间内的狗之间，也可以检测到脂蛋白谱的重要差异。血清TAG和胆固醇浓度在参考区间内的迷你雪纳瑞犬的脂蛋白图谱与其他品种的犬有显著差异。此外，还进一步证实了小型雪纳瑞犬的特定脂蛋白组分与高三酰甘油血症有关。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

本研究结果表明，使用NaBiEDTA的密度梯度超离心是一种有用的筛选方法，可用于研究狗的脂蛋白图谱。因此，这种方法可以潜在地用于诊断目的，以分离怀疑有脂蛋白异常的狗与健康的狗。gydF4y2Ba

自20世纪40年代以来，对健康狗的血清或血浆中脂蛋白谱的调查一直是偶尔研究的主题[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4gydF4y2Ba］．我们目前对犬类脂蛋白的了解大部分来自20世纪70年代的研究报告，这些研究将狗作为人类心血管疾病的可能模型[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba］．更多最近的研究调查了犬类脂蛋白与几种疾病条件或生理阶段的关系[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba11gydF4y2Ba］．这些研究提供了犬血清或血浆中发现的主要血清脂蛋白组分的重要信息，即乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。gydF4y2Ba

过去用于研究犬类脂蛋白的方法包括电泳、顺序密度梯度离心和尺寸排除方法[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba11gydF4y2Ba］．这些方法普遍存在分辨率不足的问题，无法捕捉到脂蛋白连续密度分布的详细信息。此外，还需要高度专业化的分析超离心和成像技术来测量连续的密度信息。技术和时间障碍限制了连续脂蛋白密度谱(CLPDP)在人类和兽医医学中的应用研究，但梯度生成化学、离心和成像技术的最新发展在很大程度上克服了这些障碍[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．目前，详细和可高度复制的CLPDP已很容易获得[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．这些改进方法的分析分辨率、速度和简单性表明CLPDP可能适合于快速临床和发现目的，特别是在血清或血浆脂质浓度单独不确定的情况下。这种情况发生在人类[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba和动物的[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba，gydF4y2Ba17gydF4y2Ba)的人口。在研究环境中，快速筛选剖面以识别感兴趣的密度亚组分以进行进一步成分表征的能力具有很高的实用价值[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba］．在实用上，新的脂蛋白分析方法被慢慢引入临床实践，用于诊断目的，并用于临床研究，使用分析和统计方法的组合进行风险评估[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19gydF4y2Ba］．这样的新方法以前没有应用于狗，因此这些技术应用的可行性和实用性在该物种尚不清楚。gydF4y2Ba

影响脂蛋白代谢的疾病在犬类中既常见又具有临床意义[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．狗最常见的脂蛋白代谢紊乱是继发于其他疾病，如糖尿病、甲状腺功能减退和肾上腺皮质亢进[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．迷你雪纳瑞犬在血脂和脂蛋白方面特别有趣。原发性高三酰甘油血症是美国小型雪纳瑞犬的常见疾病。在一项研究中，被调查的192只迷你雪纳瑞犬中有32.8%存在高三酰甘油血症[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．在这一品种中，高脂血症，更具体地说，高三酰甘油-cerolemia，可能与肝胆疾病、胰腺炎、胰岛素抵抗和眼部疾病等疾病有关[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba，gydF4y2Ba17gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba22gydF4y2Ba］．小型雪纳瑞犬高三酰甘油血症的生化、代谢和遗传基础尚未确定。先前的研究表明，小型雪纳瑞犬高三酰甘油血症的主要特征是VLDL的异常积累，伴有或不伴有高乳糜微粒血症[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

尽管脂蛋白代谢异常在犬类临床医学中的重要性，但之前使用的大多数脂蛋白图谱分析方法都相当费力和耗时，这一直是脂蛋白图谱分析在犬类中广泛临床应用和使用的主要障碍。较新的CLPDP技术不受特定密度区间的限制，需要少量血清或血浆，并可在几小时内完成[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．结合分解脂蛋白的快速成像和适当的统计分析，这些技术能够更好地从更完全分解的脂蛋白亚类中捕获诊断价值。为此，一种方便、经济、可靠的脂蛋白图谱分析方法在临床应用中可用于诊断目的是非常可取的。本研究的目的是评估一种新型密度梯度超离心方法在犬类中的可行性，并评估该方法根据不同品种的健康犬、健康迷你雪纳瑞犬和原发性高三酰甘油血症的迷你雪纳瑞犬的脂蛋白谱来区分它们的能力。gydF4y2Ba

所有参与研究的业主都签署了知情的业主同意书。该研究方案得到了德克萨斯农工大学临床研究审查委员会(CRRC#08-37)的审查和批准。gydF4y2Ba

动物gydF4y2Ba

第一组:由各种犬种组成的参考种群gydF4y2Ba

选择血清三酰甘油(TAG)和胆固醇浓度在各自参考区间内的各品种健康犬35只作为参考群体。入选标准包括迷你雪纳瑞犬种以外的犬种，未被报道有任何脂蛋白代谢障碍的犬种[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]，采血时无任何临床体征，无疾病史或目前使用已知影响脂质代谢的药物。测定所有犬的血清TAG和胆固醇浓度。gydF4y2Ba

第二组:迷你雪纳瑞犬gydF4y2Ba

样本从300个小型雪纳瑞犬样本中选取，这些样本是正在进行的与该品种高三酰甘油血症相关的项目的一部分。所有被纳入第2组的迷你雪纳瑞犬在采血时必须没有任何临床症状，也没有疾病史或使用过影响脂质代谢的药物。测量第2组所有犬的血清TAG和胆固醇浓度，并将犬分为2个亚组。gydF4y2Ba

2A组-体重正常的小型雪纳瑞犬gydF4y2Ba

纳入31只血清TAG和胆固醇浓度在各自参考区间内的迷你雪纳瑞犬。这些狗被挑选为7岁或更大。因为年龄会影响该品种的脂蛋白浓度和分布，所以为了减少将来患高脂血症的可能性，制定了年龄标准。小型雪纳瑞犬在7岁前没有出现高甘油三酯血症，将来也不太可能出现高甘油三酯血症[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

2B组-高甘油三酯型小型雪纳瑞犬gydF4y2Ba

31只血清TAG浓度高于参考区间上限(>108 mg/dL)的迷你雪纳瑞犬也纳入了研究。此外，在这组狗中，测量血清犬类特异性胰腺脂肪酶(Spec cPL)、葡萄糖、总T4和游离T4(在血清总T4低于参考区间下限的情况下)浓度，以评估这些狗的任何可能导致高三酰甘油血症的潜在潜在疾病。基于每只犬的历史信息和所进行的测试结果，本研究纳入的所有高三酰甘油血症犬均被诊断为原发性特发性小型雪纳瑞犬高三酰甘油血症[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

血液采集和处理gydF4y2Ba

住在相对靠近德州农工大学胃肠实验室的主人被告知要在该地点预约采血。不能来德州农工大学采血的主人每人会收到一个装有冰袋和采血所需材料的泡沫塑料盒子，并被要求与他们的兽医预约采血时间。所有的狗主人都被告知在预定的采血前至少12小时不要喂狗。从每只狗身上采集10毫升血液，注入一个红色顶部的试管(不添加添加剂)。凝块形成后，立即将样本离心，并将血清从凝块中分离。没有在德州农工大学收集的样本被包裹在冰中，通过连夜快递送到胃肠道实验室。血清样本保存在−80°C，直到分析。gydF4y2Ba

问卷及同意书gydF4y2Ba

所有狗的主人都被要求为每只狗填写一份问卷。问题包括狗的出生日期、性别、体重、目前的饮食、目前的药物治疗以及目前和过去的健康史。研究人员审查了所有狗的调查问卷，以确定这些狗是否符合每一组的纳入标准。gydF4y2Ba

化验gydF4y2Ba

血清TAG(参考区间:26-108 mg/dL)、胆固醇(参考区间:124-335 mg/dL)和葡萄糖(参考区间:60-120 mg/dL)浓度由自动酶促测定法测定gydF4y2Ba^{一个gydF4y2Ba}．血清Spec cPL浓度(参考区间:≤200 μg/L)采用经分析验证的免疫分析法测定，如别处所述[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba］．采用固相化学发光竞争法测定血清总T4浓度gydF4y2Ba^bgydF4y2Ba．用商业平衡透析放射免疫法测定血清游离T4浓度gydF4y2Ba^cgydF4y2Ba．gydF4y2Ba

脂蛋白概要分析gydF4y2Ba

使用先前描述的经过一些修改的铋钠乙二胺四乙酸(NaBiEDTA)密度梯度超离心方法进行脂蛋白谱分析[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．BiEDTA钠盐被描述为一种新的溶质，在血清样品的超离心分离脂蛋白过程中形成自生密度梯度[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．简单地说，每个样品为1,284 μL的0.18M NaBiEDTAgydF4y2Ba^dgydF4y2Ba将梯度溶液加入1.5 mL试管中。荧光探针6-(N-(7-硝基-2-氧基-1,3-重唑-4-基)氨基己基)鞘氨醇gydF4y2Ba^egydF4y2Ba用1 g/mL DMSO重组，每管加入10 μL 1 mg/mL DMSO溶液标记脂蛋白。每管加血清6 μL，使总容积为1300 μL。以1400转/分的转速旋转10秒，将1150 μL转入超离心管中gydF4y2Ba^fgydF4y2Ba因为这是在超离心过程中在开顶管中保留的最大液体量。混合物被允许在5°C孵育30分钟，以允许荧光探针饱和脂蛋白。然后，在贝克曼Optima超离心机中，以1200000转/分，5°C，离心6小时gydF4y2Ba^ggydF4y2Ba采用30°固定角TLA 120.2转子gydF4y2Ba^hgydF4y2Ba．每次运行都包含一个质量控制样本，以验证达到了适当的操作条件。在超离心后，每个样品的顶部都小心地用250毫升正己烷分层，以消除来自半月板的光学干扰，并立即成像。gydF4y2Ba

对于成像，每个管被放置在定制的内部成像仪器中，如前所述[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．样品的成像使用定制的荧光成像系统，包括一个数码相机gydF4y2Ba^我gydF4y2Ba采用MH-100金属卤化物连续光源gydF4y2Ba^jgydF4y2Ba位于一个黑暗的房间里。两个过滤器gydF4y2Ba^kgydF4y2Ba匹配NBD C的激发(以407 nm为中心的蓝紫色滤波器)和发射(切割波长为515 nm的黄色发射长通滤波器)特性gydF4y2Ba_6gydF4y2Ba-cermide。选择增益为1.0000，目标强度为30%，曝光时间为53.3 ms。为了进行分析，使用商用软件程序将每根试管的超离心图像转换为密度剖面图gydF4y2Ba^lgydF4y2Ba．建立了管坐标刻度，其中0.0 mm为管的顶部，34.0 mm为管的底部[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba］．然后将平均荧光强度绘制为管坐标的函数。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

所有统计分析均使用商业统计软件包gydF4y2Ba^{m, n, ogydF4y2Ba}．数据用Shapiro-Wilk检验进行正态分布分析。正态分布数据以均数±标准差报告，采用t检验进行分析。非正态分布数据报告为中位数和极差，并使用Mann-Whitney检验进行分析。采用切片逆回归(SIR)对密度剖面测量的维数进行降维，检验群体分配与CLPDP之间存在关系的假设[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba］．非参数相关性被用来检验参数之间的线性关系。所有分析的显著性均为p<0.05。gydF4y2Ba

人像图的狗gydF4y2Ba

入选犬的品种、性别、性状况、体况评分(BCS)和年龄见表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

三组间BCS比较差异无统计学意义(p=0.478)。1组犬的年龄显著小于2A组(p<0.0001)和2B组(p<0.0001)。2A组与2B组年龄差异无统计学意义(p=1.0)。此外，各组间犬的性别差异无统计学意义(p值均为>0.05)。gydF4y2Ba

血清TAG和胆固醇浓度gydF4y2Ba

第1组犬血清TAG浓度(中位数:52 mg/dL;范围:27-105 mg/dL)，与2A组无显著差异(中位数:54 mg/dL;范围:19 - 108 mg / dL;P值> 0.05;数字gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)．第1组犬血清胆固醇浓度(中位数:221 mg/dL;范围:97-308 mg/dL)显著高于2A组(中位数:168 mg/dL;范围:74 - 316 mg / dL;p值= 0.003;数字gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)，尽管两组的所有值都在参考区间内。gydF4y2Ba

2B组犬血清TAG浓度范围为218 mg/dL ~ 3975 mg/dL(中位数:750 mg/dL)。31只狗中的11只(35%)也患有高胆固醇血症。血清胆固醇浓度从158 mg/dL到575 mg/dL(中位数:296 mg/dL)。与预期的一样，2B组犬的血清TAG (p<0.05)和胆固醇(p<0.05)浓度均显著高于2A组犬(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)．同样，2B组犬血清中TAG (p<0.05)和胆固醇(p<0.05)浓度均显著高于1组犬(图)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

连续脂蛋白密度分析gydF4y2Ba

11个独立的脂蛋白组分仅根据密度特性而不是其功能特性或组成进行了鉴定。事实上，大多数脂蛋白组分的功能特征和组成目前尚不清楚。因此，在脂蛋白指纹图谱中，所有分配给传统功能类别，如LDL或HDL，都被严格认为是名义上的。密度范围分为R1至R11如下:gydF4y2BadgydF4y2Ba<1.017 g/mL, R2 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.019 ~ 1.023 g/mL)， R3 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.023至1.029 g/mL)， R4 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.029至1.039 g/mL)， R5 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.039至1.050 g/mL)， R6 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.050至1.063 g/mL)， R7 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.063至1.091 g/mL)， R8 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.091至1.110 g/mL)， R9 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.110至1.133 g/mL)， R10 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.133 ~ 1.156 g/mL)， R11 (gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.156至1.179克/毫升)[gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．根据以前发表的分类和仅基于它们的密度特征，这些组分可以被分类为:标签-到达脂蛋白(TRL;乳糜微粒和VLDL;gydF4y2BadgydF4y2Ba< 1.017 g / mL),低密度脂蛋白gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.019 - 1.023 g/mL)， LDLgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.023 - 1.029 g/mL)，低密度脂蛋白gydF4y2Ba_3.gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.029至1.039克/毫升)，低密度脂蛋白gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.039 - 1.050 g/mL)， LDLgydF4y2Ba_5gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.050至1.063克/毫升)，高密度脂蛋白gydF4y2Ba_{2 bgydF4y2Ba}（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.063至1.091 g/mL)， HDLgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.091至1.110 g/mL)， HDLgydF4y2Ba_3gydF4y2Ba（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.110 ~ 1.133 g/mL)，高密度脂蛋白gydF4y2Ba_{3 bgydF4y2Ba}（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.133 ~ 1.156 g/mL)和HDLgydF4y2Ba_{3 cgydF4y2Ba}（gydF4y2BadgydF4y2Ba=1.156至1.179 g/mL)， [gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．高密度脂蛋白gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba通常在健康的人身上找不到，但在健康的狗身上确实会发生[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba］．然而，并没有令人信服地表明，之前描述的犬类HDLgydF4y2Ba_1gydF4y2Ba与人的HDL具有相同的功能gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba，犬类HDL密度范围gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba尚未准确确定(先前公布的密度在1.025至1.1之间)[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba］．通过额外的成分分析来确定该组分的密度区间不是本研究的目的。gydF4y2Ba

组1和组2A的连续脂蛋白密度图gydF4y2Ba

数字gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba显示了1组狗的代表性脂蛋白图谱。很明显，最丰富的脂蛋白组分是R7到R11 (d=1.063-1.0179)，在23 mm到31 mm之间的管坐标处可见，最有可能代表HDL。R2至R6组分，极有可能代表LDL，在9毫米至23毫米的管坐标处可见，但除了R5和R6 (d = 1.038-1.063 g/mL)外，它们的含量非常小。R1部分，很可能代表TRL (d≤1.017 g/mL)，在6 mm到9 mm的管坐标处可见，推测含有乳糜微粒、VLDL、乳糜微粒和VLDL残体。TRL的含量非常少。gydF4y2Ba

数字gydF4y2Ba4gydF4y2Ba显示了2A组狗的代表性CLPDP。在参考区间(2A组)内，血清TAG和胆固醇浓度的迷你雪纳瑞犬的脂蛋白谱在主要脂蛋白种类的丰度方面与第1组犬的脂蛋白谱大致相似。然而，通过SIR进一步分析，2A组的大多数狗在某些脂蛋白组分上存在明显差异。gydF4y2Ba

切片逆回归分析用于预测1组和2A组之间脂蛋白谱是否存在差异，也用于测试脂蛋白谱是否有效地预测每只狗属于哪一组。根据记录预测概率有效性的分类表，每只狗所属的群体(即迷你雪纳瑞与其他品种)可以根据它们的脂蛋白谱在85%的情况下准确预测(特征值=0.5455;p = 0.00017;数字gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)．具体来说，90%的迷你雪纳瑞犬可以被归类为迷你雪纳瑞犬，80%的其他品种的狗可以被归类为其他品种，仅根据它们的脂蛋白图谱。作为预测指标的最重要的脂蛋白组分是R1, R5 - R6 (d = 1.038-1.063 g/mL)(图)gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)．正常血脂的迷你雪纳瑞犬的R1(可能是TRL)峰值比其他品种的犬更显著，而其他品种的犬的R5和R6峰值(可能是名义LDL)更显著gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba和低密度脂蛋白gydF4y2Ba_5gydF4y2Ba山峰)。gydF4y2Ba

2B组犬的连续脂蛋白密度图gydF4y2Ba

数据gydF4y2Ba6gydF4y2Ba一个和gydF4y2Ba6gydF4y2Bab显示2B组两只狗的代表性脂蛋白图谱。与1组和2A组的狗类似，R7 - R11(可能对应于高密度脂蛋白)在该组中含量较高，而R2 - R6(可能对应于低密度脂蛋白)含量较低。然而，这组狗有明显的R1峰可能对应于TRL区域。gydF4y2Ba

切片逆回归分析用于预测2A组和2B组之间脂蛋白谱是否存在差异，也用于测试哪些脂蛋白谱对预测每只狗属于哪一组是否有效。SIR模型表明，在95%的情况下，根据它们的脂蛋白谱(特征值=0.7638;p = 0.000002;数字gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)．具体来说，97%的非高甘油三酯型迷你雪纳瑞被正确分类，94%的高甘油三酯型迷你雪纳瑞仅根据CLPDP数据被正确分类。到目前为止，作为预测指标的最重要的脂蛋白分数是TRL分数，这在高三酰甘油血症的狗中更为显著。血清TAG浓度在参考区间内的小型雪纳瑞犬中，R3、R4和R5 (1.023-1.050 g/mL)对应的分数更为显著(图)gydF4y2Ba6gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

相关性gydF4y2Ba

非参数相关检验用于检验SIR模型中显示显著性的脂蛋白组分与血清TAG和/或胆固醇浓度之间是否存在线性关系。名义TRL (R1)强度与血清TAG浓度均呈显著正相关(Spearman r=0.81;95%可信区间= 0.73 - -0.87;p<0.0001)和血清胆固醇浓度(Spearman r=0.61;95%可信区间= 0.46 - -0.72;p < 0.0001)。血清胆固醇浓度和名义LDL之间也存在显著但微弱的正相关gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba(R3)分数(Spearman r=0.42;95%可信区间= 0.24 - -0.58;p < 0.0001),低密度脂蛋白gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba(R5)(枪兵r = 0.31;95%可信区间= 0.11 - -0.48;p = 0.0023)。gydF4y2Ba

该方法操作简单，是一种快速、准确的犬脂蛋白分析筛选方法。用该方法检测了不同组间的脂蛋白图谱的重要差异。本研究的一个重要和新颖的发现是，血清TAG和胆固醇浓度在参考区间内的迷你雪纳瑞的脂蛋白图谱与其他各种品种的狗有显著不同。此外，本研究证实并扩展了以前的研究结果，即特定的脂蛋白类与小型雪纳瑞犬的高三酰甘油血症有关。gydF4y2Ba

据我们所知，这是第一项表明血清TAG和胆固醇浓度正常的迷你雪纳瑞在某些脂蛋白组分(R1和R5可能对应于TRL和LDL)上存在显著差异的研究gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba)和其他品种的狗。先前的一项研究[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]发现了一小部分健康的迷你雪纳瑞犬(11只研究中的4只)与其他品种的狗相比在某些脂蛋白组分(低密度脂蛋白和VLDL)上有所不同。然而，在这项特别的研究中，迷你雪纳瑞根据血浆的大体外观而不是测量到的TAG浓度被分类为非脂血症。事实上，所有4只被分类为“不同”的非脂质迷你雪纳瑞犬的血浆TAG浓度都有轻微的升高，因此，存在轻微的脂质代谢改变。gydF4y2Ba

尽管两组间血清TAG浓度无显著差异，且血清TAG和胆固醇浓度均在参考区间内，但2A组的迷你雪纳瑞犬的R1分数(可能是TRLs)明显高于其他品种的犬。有趣的是，与迷你雪纳瑞犬相比，其他犬种的血清胆固醇浓度明显更高。这种差异可能与其他犬种的R5分数明显高于迷你雪纳瑞犬有关。然而，与血清TAG浓度类似，血清胆固醇浓度均在参考区间内。R5的密度区间为d = 1.039-1.050 g/mL，这是一个可以包含LDL的密度区域gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba还有大量的浮力高密度脂蛋白[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba］．尽管血清TAG和胆固醇浓度正常，但迷你雪纳瑞犬和其他犬种的脂蛋白图谱存在显著差异，这明显表明血清TAG和胆固醇浓度对检测犬的脂蛋白代谢差异不敏感。这些脂蛋白图谱的差异可以在绝大多数狗身上识别出来，因为大约90%的狗可以仅根据它们的脂蛋白图谱被分为正确的组。gydF4y2Ba

迷你雪纳瑞犬与血清TAG和胆固醇浓度正常的其他犬种之间脂蛋白谱差异的原因尚不清楚。这一发现的临床重要性也是未知的。对于这种差异，一种可能的情况是，一些迷你雪纳瑞可能有脂蛋白代谢的早期障碍，这还没有影响整个血清的TAG和胆固醇浓度，但这些浓度可能在未来受到影响。这一假设得到了之前一项研究结果的支持，该研究表明，小型雪纳瑞犬的高脂血症是一种与年龄有关的疾病[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．然而，在本研究中，这似乎不是一个合理的解释，因为所有纳入本研究的血清TAG浓度在参考区间内的迷你雪纳瑞犬都在7岁以上(中位年龄:9.3岁)。因此，这些狗的年龄已经相当大，不太可能在以后的生活中发生高三酰甘油血症[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba］．另一种可能性是，大多数迷你雪纳瑞犬的基本脂蛋白代谢与其他品种的犬不同，但只有一部分狗有严重的脂质代谢紊乱，导致高脂血症。此外，饮食成分的差异或至少在一定程度上解释了脂蛋白图谱的差异。两组狗的性别差异可能也起了作用，尽管这在之前的研究中没有得到证实。显然，需要进一步的研究来确定这一发现的原因及其临床意义。此外，快速筛选整个血清脂蛋白密度剖面的能力已经确定了特定的密度区域，可用于进一步的成分研究，可能确定发生在小型雪纳瑞特有脂蛋白代谢的机制。gydF4y2Ba

患有高三酰甘油血症的小型雪纳瑞犬的脂蛋白图谱与以前的研究结果一致[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba］．有趣的是，高脂血症和正常脂血症的迷你雪纳瑞之间的主要区别是高脂血症迷你雪纳瑞R1 (TRL)分数显著增加，并且TRLs与血清TAG浓度之间有很强的相关性。与之前的研究相似，高密度脂蛋白分数没有差异[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba］．有趣的是，目前的研究表明，一个特定的分数(R3可能对应于LDL的密度gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba)在患有高脂血症的迷你雪纳瑞犬中显著降低。gydF4y2Ba

另一个有趣的观察是，患有高脂血症的迷你雪纳瑞的CLPDP虽然与没有高脂血症的迷你雪纳瑞的脂蛋白谱不同，但差异很大，同一组狗之间存在明显的差异。这些差异并不总是与这些狗的高脂血症的不同程度有关。例如，许多高血脂迷你雪纳瑞的TRL分数有两个不同的峰值(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)，而其他人只有一个(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)．这两个峰可能代表乳糜微粒和vldl，它们的密度略有不同。这与一项较早的研究结果一致[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]，研究表明，一些高脂血症的迷你雪纳瑞犬仅vldl增加，而另一些则同时增加vldl和乳糜微粒。目前还不清楚为什么一些高脂血症迷你雪纳瑞犬只有一个TRL分数受影响，而另一些则有两个。此外，如以往研究所示[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)，如果这些狗的血清胆固醇浓度增加，则会减少一部分。因此，很明显，迷你雪纳瑞的高脂血症不是一种表型一致的疾病。这可能是环境因素影响的结果，也可能是遗传异质性的结果。gydF4y2Ba

两组迷你雪纳瑞犬的年龄都明显高于本研究中使用的其他品种的犬。这是特定选择标准的结果。众所周知，迷你雪纳瑞犬的高血脂是一种与年龄有关的情况，因此，第2组的狗必须是年龄较大的狗，以便发展其表型的高概率，如果它们实际上是发展高三酰甘油血症。例如，在一项研究中，只有16% 1 - 3岁的迷你雪纳瑞患有高三酰甘油血症，而78% 9岁的迷你雪纳瑞患有高三酰甘油血症。在迷你雪纳瑞犬以外的犬种中，没有报告或怀疑年龄与血清TAG或胆固醇浓度之间的联系。gydF4y2Ba

需要指出的是，在本研究中描述的目前的方法不允许对每个脂蛋白组分的详细描述。如前所述，脂蛋白组分的识别仅基于密度特征，而不是其功能性质或组成，这在很大程度上是未知的狗。因此，在脂蛋白指纹图谱中，所有分配给传统功能类别，如LDL或HDL，都被严格认为是名义上的。需要进一步研究犬类脂蛋白组分的确切含量和功能特性。gydF4y2Ba

总之，本研究的结果表明，使用NaBiEDTA的密度梯度超离心是一种有用的筛选方法，用于研究狗的脂蛋白图谱。因此，这种方法可以潜在地用于诊断目的，以分离怀疑有脂蛋白异常的狗与健康的狗。该方法即使在血清TAG和胆固醇浓度在参考区间内的犬只之间也可以检测到脂蛋白谱的重要差异，通过鉴别分析可以根据其脂蛋白谱有效地将不同组的犬只区分开来。血清TAG和胆固醇浓度在参考区间内的迷你雪纳瑞的脂蛋白谱有显著差异(主要是R1和R5部分，根据密度特征，对应TRL和LDLgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba)而不是其他品种的狗。此外，进一步建立了基于密度特征的特定脂蛋白组分(R1和R3)对应于TRL和LDLgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba)与迷你雪纳瑞高三酰甘油血症有关。在患有高脂血症的迷你雪纳瑞犬中，这些脂蛋白组分的变化并不总是一致的。需要进一步的研究来评估使用NaBiEDTA的密度梯度超离心在评估狗的其他原因的高脂血症方面的有用性，并建立小型雪纳瑞犬脂蛋白图谱差异的临床意义。gydF4y2Ba

^{一个gydF4y2Ba}罗氏/日立模块化分析D 2400模块，罗氏诊断，印第安纳波利斯，IN;gydF4y2Ba^bgydF4y2BaImmulite 2000犬全T4，西门子医疗保健诊断，Deerfield, IL;gydF4y2Ba^cgydF4y2Ba免费T4 (ED)， Antech Diagnostics, Irvine, CA;gydF4y2Ba^dgydF4y2Ba乙二胺四乙酸铋钠，TCI AMERICA，波特兰，OR;gydF4y2Ba^egydF4y2BaNBD CgydF4y2Ba_6gydF4y2Ba神经酰胺;NBD CgydF4y2Ba_6gydF4y2Ba神经酰胺，分子探针公司尤金,或;gydF4y2Ba^fgydF4y2Ba厚壁，聚碳酸酯(1毫升，11 x 34毫米)，Beckman Coulter Inc.，布雷亚，加州;gydF4y2Ba^ggydF4y2Ba及- 110;Beckman Coulter Optima TLX-120超离心机，Beckman Coulter Inc.， Brea, CA;gydF4y2Ba^hgydF4y2BaBeckman Coulter Inc, Brea, CA;gydF4y2Ba^我gydF4y2Ba数码微火相机，Optronics, Goleta, CA;gydF4y2Ba^jgydF4y2BaMH-100, Dolan-Jenner Industries, Boxborough, MA;gydF4y2Ba^kgydF4y2BaSCHOTT北美公司，Elmsford, NY;gydF4y2Ba^lgydF4y2BaOrigin 7.0, Microcal软件公司，北安普顿，马萨诸塞州;gydF4y2Ba^米gydF4y2BaSPSS 16.0, SPSS Inc.，芝加哥，伊利诺伊州;gydF4y2Ba^ngydF4y2BaPrism5, GraphPad，圣地亚哥，加州;gydF4y2Ba^ogydF4y2BaR,gydF4y2Bahttp://www.r-project.org/gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

这项研究是自费的。作者要感谢迷你雪纳瑞的主人和他们的兽医为目前的研究提供样本。gydF4y2Ba

作者和联系gydF4y2Ba

1. 德克萨斯农工大学兽医和生物医学学院小动物临床科学系胃肠实验室，4474 TAMU, College Station，德克萨斯州，77843gydF4y2Ba

   Panagiotis G Xenoulis, Jan S Suchodolski & Jörg M SteinergydF4y2Ba

2. 德克萨斯农工大学化学系心血管化学实验室，美国77842大学城3255 TAMUgydF4y2Ba

   保罗J Cammarata和罗纳德D麦克法兰gydF4y2Ba

3. 德克萨斯农工大学营养与食品科学系和家禽科学系，2253 TAMU, College Station，德克萨斯州，77843gydF4y2Ba

   迷迭香L WalzemgydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2BaPanagiotis G XenoulisgydF4y2Ba．gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者声明他们没有竞争利益。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

PGX构思、设计、实施了这项研究，分析了数据，并撰写了论文。PC负责数据采集、数据分析和论文修改。RLW, RM, JSS和JMS对数据的采集和论文的修改都有贡献。所有作者阅读并批准了最终稿件。gydF4y2Ba

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再版和权限gydF4y2Ba