mtDNA分析揭示了罗马尼亚和中欧历史省份之间的遗传亲和性

背景

罗马尼亚作为亚洲和欧洲的重要十字路口，经历了不断的移民和入侵事件。精确的路线可能是由领土的拓扑结构决定的，并对历史上罗马尼亚省份的线粒体DNA (mtDNA)的遗传结构产生了不同的影响。我们研究了714名来自所有历史省份的罗马尼亚人，瓦拉几亚，多布鲁贾，摩尔达维亚和特兰西瓦尼亚，通过分析mtDNA控制区和编码标记来涵盖mtDNA单倍群的完整景观。

结果

我们观察到大多数单倍群在罗马尼亚各省的同质分布，并与欧洲人口有明确的联系。主成分分析和多维尺度分析支持瓦拉几亚、摩尔达维亚和多布鲁贾族群与巴尔干半岛族群的遗传相似性，而特兰西瓦尼亚族群与中欧族群的遗传相似性密切。这些发现可以用罗马尼亚领土的拓扑结构来解释，喀尔巴阡拱门在迁移模式中发挥了重要作用。在罗马尼亚所有历史省份都观察到亚洲母系血统的信号，表明基因沿着东亚和欧洲的迁徙路线流动。

结论

我们目前基于罗马尼亚历史省份人口mtDNA分析的发现表明，特兰西瓦尼亚和中欧人口之间存在相似性，这得到了几个欧洲和亚洲母系单倍群频率的观察和MDS分析的支持。

罗马尼亚位于欧洲东南部，是黑海中央盆地和多瑙河下游盆地的一部分，国家在中部被喀尔巴阡山脉-巴尔干山脉系统所分割。作为多瑙河盆地的一部分，这片领土是亚洲与东南、中欧和北欧之间的主要十字路口，也是连接北庞蒂克草原的直接向东路线之一。罗马尼亚语是东罗曼语的一部分，在罗马化过程中由口语拉丁语演变而来，随后在六世纪初受到斯拉夫语的影响。1］．

欧洲最早的解剖学上的现代人类化石被认为是旧石器时代晚期在罗马尼亚的pettera cu Oase(有骨头的洞穴)中发现的，距今约35 ka¹⁴C bp [2和pezotera Muierii (~30 ka .¹⁴C bp) [3.］．

新石器时代和青铜时代的人口流动塑造了今天罗马尼亚人口的遗传变异，特别是在新石器时代中期[4］．在铁器时代，在多瑙河盆地和喀尔巴阡拱门所界定的领土上，考古记录和历史资料揭示了靠近色雷斯人的印欧人口的存在，他们可能在公元前2000年到达特兰西瓦尼亚，被称为达西亚人，在瓦拉几亚，多布鲁贾和比萨拉比亚被称为盖泰人[5］．

罗马人对达西亚的部分征服(1^圣到2^nd公元几个世纪)，除了现在的摩尔达维亚地区，特兰西瓦尼亚东北部和瓦拉几亚东部，随后是罗马帝国的各种群体(意大利人，伊利里亚人，色雷斯人，希腊人，凯尔特人，日耳曼人和东部或北非人)的殖民时期，他们主要定居在特兰西瓦尼亚[6］．

从6年级开始^th在公元12世纪末，斯拉夫人广泛地渗透到今天的罗马尼亚领土，并最终被同化为达科-罗马尼亚人、原始罗马尼亚人和罗马尼亚人^th世纪(6］．

罗马尼亚现在的领土在中世纪(约14年)被分割^th三种不同的政治结构:瓦拉几亚、摩尔达维亚和特兰西瓦尼亚。在中世纪的大部分时间里，Dobrudja都处于奥斯曼帝国的统治之下。在接下来的几个世纪里，罗马尼亚历史上的省份一直处于拜占庭帝国、奥匈帝国、哈布斯堡帝国、奥斯曼帝国和俄罗斯帝国的宗主权之下。然而，除了特兰西瓦尼亚，这些帝国对人口没有重大影响，在10年之间，在匈牙利王国的统治下，特兰西瓦尼亚经历了Székelys、撒克逊人和匈牙利人的大规模殖民^th和13^th世纪(7］．

在不同的政治和宗教影响下，历史上的省份或多或少独立发展了500多年，直到19世纪统一为一个正式命名为罗马尼亚的国家^th世纪。

目前，很少有研究基于线粒体DNA (mtDNA)单倍群来评估罗马尼亚人群的遗传组成。罗马尼亚人群的MtDNA变异主要在跨国研究中进行分析，这些研究的特点是在整个罗马尼亚领土上收集了相对较少的样本，以涵盖完整的MtDNA单倍群景观。先前的研究表明，罗马尼亚人与其他欧洲人具有基因相似性[8- - - - - -11]，而另一项研究则指出中东地区人口可能存在种族隔离[12］．最近的一项研究检查了罗马尼亚的MtDNA变异，但样品量很小，特别是在Dobrudja和特兰西瓦尼亚地区，并且没有对历史地区进行详细的比较[13］．其他研究集中在不同少数群体的mtDNA多样性上，如Aromanian, hungary和Roma人群[10，14- - - - - -16］．

巴尔干半岛人口的母系谱系表现出遗传统一性，具有区域特有特征[10］．值得注意的是，西巴尔干地区人口之间的相似性遵循的是一种以近邻为基础的模式，这种模式与地理分布一致[17］．

为了解决信息稀缺的问题，并提高我们对欧洲和中东人群mtDNA变异的理解，我们分析了来自四个历史省份的714名罗马尼亚人。我们的目的是揭示来自历史省份的人口之间的特定遗传差异，这些省份可能经历人口组合，作为过去迁移、本地混合和殖民事件的后果。

道德

在患者进入研究之前，根据符合《赫尔辛基宣言》的协议，采集样本和随后的分析获得了书面知情同意，并且该研究得到了罗马尼亚布加勒斯特“Carol Davila”医学和药学大学伦理委员会的批准。

人口数据集

本研究分析的样本来自主要历史省份瓦拉几亚(n= 226)， Dobrudja (n= 46)，摩尔达维亚(n= 235)，以及特兰西瓦尼亚(n= 207)。样本随机收集自母亲无关的受试者，至少三代(父母和祖父母)的已知家谱信息。对于所有样本，与罗马尼亚县的确切隶属关系(n= 41)，构成了今天罗马尼亚的行政区划1:表S1)。

线粒体DNA测序及单倍型鉴定

使用PureLink基因组DNA Mini Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)从200 μL EDTA全血或口腔拭子中提取基因组DNA。对于所有样本，mtDNA控制区的高变片段HVS I(位置16024-16416)和HVS II(位置1-410)使用两对引物进行测序，如前所述[11］．

PCR在25 μL反应液中进行，反应液为1× PCR缓冲液(15 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM KCl)， dNTP各200 μM, MgCl 2.5 mM₂，每个引物0.2 μM, 0.2 U AmpliTaq Gold DNA聚合酶(Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)，大约30 ng DNA。扩增产物使用QIAquick PCR纯化试剂盒(Qiagen, Hilden, Germany)进行纯化，并使用ABI 3130XL遗传分析仪(Applied Biosystems, Waltham, MA, USA)的Big Dye Terminator v3.1循环测序试剂盒进行测序。为了解决分类不明确的样本，使用18个编码区域位置的基于PCR限制性片段长度多态性(PCR- rflp)协议的分层系统进行单倍群分配，如其他地方所述[18］．

使用ABI PRISM SeqScape v.2.5编辑序列。每个个体的HVS I和HVS II区域序列使用MEGA 6手动对齐，并与修订的剑桥参考序列rCRS进行比较[19，20.］．

我们在不同的pcr(热循环仪)中扩增了两个HVSI和HVSII片段，并证实了两名研究人员的单倍群配位，以降低人工重组的概率。根据正向和反向测序结果对序列进行了验证。

单倍群分配基于本研究所有样本的HVS I和HVS II序列，并通过在线程序确定，即HaploGrep [21]， Mitomap [22]和Phylotree (mtDNA树Build 16) [23］．

加入数据

本研究714例受试者的对照区序列可在GenBank上获得，登录号为KT945272-KT945497(瓦拉几亚组)、KT945940-KT945993 (Dobrudja组)、KT945705-KT945939 (Moldavia组)和KT945498-KT945704(特兰西瓦尼亚组)。

统计分析

基因多样性参数，包括序列数、单倍型多样性、核苷酸多样性、多态位点数和平均成对差异数，使用DnaSP version 5进行估计。为了评估中立性，田岛的D［24]和傅的[25]使用ARLEQUIN version 3.5.2.2计算[26］．

由成对生成的距离矩阵F_圣使用ARLEQUIN 3.5.2.2版本(基于mtDNA单倍群频率)计算群体之间的值，并使用SPSS 17.0 (SPSS Inc.，芝加哥，伊利诺伊州，美国)通过多维缩放(MDS)图进行可视化。统计学意义F_圣数值评估使用10000排列。

罗马尼亚人口与欧洲和中东人口对应的两个群体的公布数据进行了比较(数据包括在附加文件中2:表S3)。

主成分分析(PCA)基于mtDNA单倍群频率，使用相同的软件进行种群间比较。通过使用network v4.5.0.0(可在http://www.fluxus-engineering.com)．获得MJN是为了更好地区分罗马尼亚各省的单倍型频率。根据之前的论文应用不同的突变权重[27- - - - - -29]，点插入和点删除被排除在分析之外。

最后，利用Surfer 9.0应用程序(Golden Software Inc.， Golden, CO, USA)，将Kriging算法应用于曲面插值图，图形化地表示了欧洲地区单倍群频率(H, U, HV, T, J, K, X, N, M, V和W)的地理分布。

我们分析了714个样本，以估计罗马尼亚四个省的遗传多样性(附加文件)1:表S1)。我们在瓦拉几亚群体中观察到较高的mtDNA单倍型多样性。分析对照区，我们平均检测到189个单倍型和k = 4.530个核苷酸差异。结果总结在附加文件中3.:表S2。

我们观察到罗马尼亚所有省份的单倍型和核苷酸多样性值相似，Dobrudja种群的核苷酸多样性略低，而特兰西瓦尼亚种群的单倍型多样性较高。我们观察到根据Tajima的D和Fu的[30.罗马尼亚所有省份(附加文件3.:表S2)。

我们在82个个体(11.48%)中观察到HVSI的长度异质性，这是由核苷酸位置16184和16193之间的poly-C束的T向C转变引起的。在HVSI中，除了长度异质性外，我们还在一个样本的16084 T/C位置和另一个样本的16237 T/C位置发现了两个序列异质性。

对Dobrudja样本进行1000次重复自举的重采样分析表明，我们分析的向量中数据的平均统计量为3.833。自举偏差仅为-0,0152，标准误差约为1.1364。平均统计的95%置信度:下界为2.08，上界为6。自举样本的男性直方图几乎正常，考虑到大量的自举复制，如附加文件所述4:图S4

正如预期的那样，我们能够将来自四个罗马尼亚种群的绝大多数个体划分为九个欧亚线粒体单倍群(H, U, K, T, J, HV, V, W和X)。所有mtDNA数据都汇总在附加文件中1:表S1。

罗马尼亚群体还表现出属于最常见的亚洲单倍群(单倍群A、C、D、I、M和N)和非洲单倍群l的序列。我们在罗马尼亚样本中检测到单倍群A、C、D和I，总频率为2.24%，与其他欧洲群体的频率一致。我们在瓦拉几亚、多布鲁贾和摩尔达维亚观察到亚洲单倍群M和N的频率相对较高，但在特兰西瓦尼亚没有，后者也缺乏M单倍群。单倍群X完全由亚单倍群X2代表，在特兰西瓦尼亚出现的频率最高。

欧洲最常见的单倍群H(40.98%)的总频率[31]，与大多数欧洲人群中观察到的频率一致，在特兰西瓦尼亚的频率相对较高，在多布鲁贾的频率较低，如图所示。1．两个亚单倍群H1和H2相当频繁(>5%)，而H3的频率为0.54%，与之前的估计相当[13，32］．

我们的数据表明单倍群U在所有分析的种群中是第二常见的，但在特兰西瓦尼亚明显低于其他地区(图2)。1)．在我们的样本中，我们检测到亚单倍群U1, U6和U7的频率分别为1.4%，0.14%和0.14%。在欧洲最古老和最流行的亚单倍群U中[33]， U5在4个省份均以单倍群U内的最高频率(47.94%)。

在瓦拉几亚、摩尔达维亚和特兰西瓦尼亚，我们检测到与其他欧洲国家相似的HV单倍群频率，但我们观察到Dobrudja人群的频率最高。关于单倍群N, M, X和V，我们发现特兰西瓦尼亚和其他三个省份之间的频率分布不同，如附加文件所述2:表S3和图。1．

为了探索罗马尼亚种群与邻近种群的遗传亲和性，我们根据线粒体单倍群的频率进行了主成分分析(PCA)。2)．第一个组成部分(PC)占总单倍群变异(30.68%)的17.34%，并将欧洲人口分为大约三个集群，罗马尼亚省形成了一个单独的组，特兰西瓦尼亚靠近轴的中心。第二个PC占总单倍群变异的13.38%，并且没有明确区分种群，尽管罗马尼亚省份形成了一个单一的聚类，瓦拉几亚在这个向量的末端与这些省份略有分离。PC1的分量负荷表明M、U1和U5的相关系数较高(分别为0.689、0.840和-0.759)，支持所分析种群的分组(图1)。2)．

单倍群M(除特兰西瓦尼亚外)和U5的高频率以及亚单倍群U1的低频率揭示了一种可以解释罗马尼亚种群在PCA图上分布的模式。PC2的组分负荷表明X具有较高的相关系数，这与瓦拉几亚省、多布鲁让省和摩尔达维亚省观察到的X单倍群的高频率相一致。

为了进一步可视化这里分析的罗马尼亚人口与欧洲和近东人口之间的关系，我们进行了成对估计F_圣基于19个邻近人群的线粒体单倍群频率，包括之前研究中的罗马尼亚mtDNA数据，或来自所有欧洲和近东的41个人群(数据见附加文件)2:表S3)。对于两种分析，都是成对总体F_圣数值无统计学意义(p= 0.00000±0.0000，F_圣测试)，表明罗马尼亚各省之间没有差异(附加文件5:表S4)。在统计分析中，我们只发现有统计学意义的差异(p= 0.00000)在这些省份和高加索、埃及或土耳其人口之间。

根据包括地理邻居或41个种群的MDS图，我们发现特兰西瓦尼亚与中欧种群的关系比与罗马尼亚其他省份的关系更密切，而罗马尼亚其他省份与巴尔干种群的关系更密切。3.和附加文件6:图S1)。

为了建立基于控制区序列的群体间关系，我们对所有主要单倍群(H, U, HV, T, J, K, X, I, N, M, V和W)建立了基于HVSI和HVSII序列的MJN;无花果。4和附加文件7:图S2)。形成网络的大多数单倍型形成了星形系统发育，而其他单倍群，如U、N和I，则没有。网络拓扑结构没有在所有网络中显示一个主要的罗马尼亚序列簇。

正如预期的那样，在罗马尼亚所有省份观察到的大量单倍型产生了一个星形的主单倍群H星团。总的来说，我们在瓦拉几亚、摩尔达维亚和特兰西瓦尼亚人群中发现了大量的共享单倍型。特别是，我们检测到摩尔达维亚和瓦拉几亚之间以及摩尔达维亚和特兰西瓦尼亚之间共享的单倍型。我们观察到单倍群U的序列多样性很高，没有星形拓扑结构;根据大多数网络，摩尔达维亚和特兰西瓦尼亚以及摩尔达维亚和瓦拉几亚之间的单倍型主要相同。对于Dobrudja，我们观察到与摩尔达维亚和瓦拉几亚共享的单倍型。

单倍群频率的整体空间分布表明，与其他三个省份相比，特兰西瓦尼亚的H、V和X单倍群频率较高，U和N的频率较低。5和附加文件8:图S3)。我们在特兰西瓦尼亚没有检测到单倍群M。

我们对714个样本的线粒体DNA控制区变异的分析证实了所有历史省份与东南欧人群的遗传亲和性，并证明了特兰西瓦尼亚样本与中欧人群的亲缘关系最密切。

我们观察到在罗马尼亚四个省中，大多数线粒体单倍群的频率分布相似。对于其他单倍群，我们检测到频率的变化，总体值在欧洲中部和东南部人群的范围内。

正如其空间频率分布所强调的那样，我们在这四个罗马尼亚省份的人群中检测到mtDNA单倍群频率的差异。我们观察到整个特兰西瓦尼亚种群的总体遗传分化，考虑到一些单倍群在该地区的频率高于或低于其他三个省份(图3)。5和附加文件8:图S3)。地理位置和与中欧人口的接近，以及由罗马尼亚拓扑结构决定的历史基因流可以解释这些数据。

mtDNA单倍群频率表明，罗马尼亚四个省份之间的遗传亲和性由PCA图支持，在PCA图中，这些种群形成了一个集群，而特兰西瓦尼亚与这个集群略有分离。该聚类在PCA分析中的位置，即从其他欧洲人群中分离出来，与基于SNP标记的一项重要研究的结果一致，该研究表明罗马尼亚人与其他东欧人群聚类，并为来自西南亚的复杂混合提供了证据[34］．

特兰西瓦尼亚在欧洲空间的位置在两种MDS分析中更为明显，这是基于成对的F_圣，这表明该省与中欧人口在遗传上明显接近，而其他三个省份则显示出巴尔干人口的空间整合。

这些观察结果与之前对Y染色体非重组区域(NRY)的分析相一致，表明喀尔巴阡人对应于一个遗传边界，这可以从喀尔巴阡山脊的东西之间的NRY标记的不连续得到证明，从中部特兰西瓦尼亚与摩尔达维亚相比的样品的独特性中得到突出证明[35，36］．

显示罗马尼亚样品对照序列总体拓扑结构的网络主要表明摩尔达维亚-瓦拉几亚和摩尔达维亚-特兰西瓦尼亚之间存在重叠的单倍型，表明这些省份之间存在基因流动。在整个共产主义时期，大量的劳动力从摩尔达维亚流向这两个省份，支持了这些观点。地理上的接近和最近的人口流动解释了在多布鲁贾、摩尔达维亚和瓦拉几亚观察到的常见单倍型。

Dobrudja的单倍群频率分布和单倍型多样性的差异也可以解释为与研究中包括的其他种群相比，Dobrudja的样本量较小。

罗马尼亚人群中亚洲mtDNA血统的存在，尽管频率较低，但表明在不同时期，即旧石器时代晚期和/或可能占较大优势的中世纪，母系血统沿东亚和欧洲的迁徙路线流动。[37，38］．值得一提的是，在特兰西瓦尼亚的两个匈牙利民族中，这些血统的频率值更高(7.9%)，这是由于他们在遗传上接近欧亚西部人口[14］．罗马尼亚人口和匈牙利少数民族之间的这种明显差异可能反映了混血的减少，正如历史上后来关于罗马尼亚撒克逊人的记录[7］．这种来自西南亚的基因的贡献并没有得到我们配对的支持F_圣值，这些值表明瓦拉几亚人、摩尔达维亚人和特兰西瓦尼亚人与分析中包括的亚洲人之间有统计学上的显著差异。多布鲁德江的人口没有表现出同样的模式;在历史上，亚洲人对该省的遗传变异影响更大．

对于单倍群L，我们发现了两个L3样本，一个在瓦拉几亚，另一个在Dobrudja(0.28%)，与欧洲人群中发现的低频率一致[39]，除了在伊比利亚半岛，那里的西安达卢西亚人有很高的非洲血统[40］．非洲单倍群L的出现可能是罗马时期来自非洲行省的殖民者的结果，也可能是17世纪初非洲人从奥斯曼帝国迁移到东欧的奴隶贸易的结果^th世纪。

这里观察到的不同遗传亲缘关系可以用罗马尼亚领土的拓扑结构来解释，随着时间的推移，它影响了特兰西瓦尼亚人口和邻近人口之间的混合，以及独特的历史证明的迁移[11]和殖民事件[12]，这可能是特兰西瓦尼亚和中欧人群基因相似的主要决定因素。在这种情况下，喀尔巴阡拱门可能在从新石器时代到中世纪的历史上明显使用的三条主要迁徙路线中发挥了决定性作用。一条路线是到波罗的海地区和北本蒂克草原，然后从那里经过横贯喀尔巴阡山口，即今天乌克兰的喀尔巴阡山口，到达蒂萨平原和特兰西瓦尼亚。第二条路线穿过瓦拉几亚、多布鲁加和摩尔达维亚，与多瑙河下游盆地和黑海有关，后者将普鲁特、德涅斯特和多瑙河下游盆地与北欧、北庞蒂克草原和巴尔干半岛连接起来。第三个是通过东喀尔巴阡山脉和南喀尔巴阡山脉的隘口。1)．考古发现证明，前两条路线在史前、罗马时期、移民时期和中世纪非常活跃，喀尔巴阡山口很少被用于大规模的人口流动。

在mtDNA分析中，根据MDS散点图，我们观察到罗马尼亚各省中大多数单倍群的均匀分布，瓦拉几亚、摩尔达维亚和多布鲁贾省的人口倾向于在斯拉夫人口中聚集在一起，而特兰西瓦尼亚与中欧人口的关系更密切。我们通过配对居群确定了西南亚的基因流F_圣在Dobrudja的情况下，严格的价值观，这一结果可以很容易地解释为整个历史上亚洲在该地区的更大影响。

我们的发现表明，特兰西瓦尼亚与中欧有更密切的亲缘关系，这得到了几个欧洲和亚洲母系的观察到的单倍群频率变化的支持，并可能归因于喀尔巴阡拱门形成的不同迁徙路线。

本研究中的线粒体DNA数据和历史区域的分化分析代表了我们对罗马尼亚线粒体多样性知识的相当大的扩展。

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死后

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在基督之前

Cca:

大约在

背景:

脱氧核糖核酸

HVS:

变异度高的地区

Kya:

一千年前

LGM:

末次冰期

LKB:

Linearbandkeramik

MDS:

多维标度

MJN:

中值连接网络

mtDNA:

线粒体DNA

NRY:

Y染色体的非重组部分

主成分分析:

主成分分析

PCR-RFLP:

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性

软:

剑桥参考序列

SNP:

单核苷酸多态性

我们感谢所有参与者的合作和提供样本。

资金

这项工作得到了罗马尼亚国家科学研究机构CNCS-UEFISCDI的两项拨款的支持，项目编号PN-II-RU-TE-2014-4-0527和PN-II-ID-PCCE 2011-2-0013;西班牙科学与创新部(GCL2016-79093/P，巴斯克政府研究小组(IT1138-16)和巴斯克大学upv /EHU (UFI 11/09)。资助者在研究设计、数据收集、分析和解释中没有任何作用，也没有参与报告的撰写或文章发表的决定。

数据和材料的可用性

本研究生成的714个受试者的对照区序列可通过以下登录号在GenBank上获得:KT945272-KT945497瓦拉几亚组)、KT945940-KT945993 (Dobrudja组)、KT945705-KT945939 (Moldavia组)和KT945498-KT945704 (Transylvania组)。

作者的贡献

RC和FR构想并设计了实验;RC、FR、SS、PC、RP、CB、AM采集并提供样品;RC、FR、SS进行实验;RC、FR、MH、SS对数据进行分析;RC、MH进行统计分析;RC和FR撰写了初稿;RC, FR, SS, PC MH和MC撰写了这篇论文。所有作者都阅读并批准了手稿的最终版本。

相互竞争的利益

作者宣称他们之间没有利益冲突。

发表同意书

本研究不适用发表同意。

伦理批准并同意参与

经罗马尼亚布加勒斯特“Carol Davila”医学和药学大学伦理委员会批准，根据符合《赫尔辛基宣言》的协议获得知情书面同意。这些方法是按照核准的准则进行的。

出版商的注意

伟德体育在线施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。

作者及隶属关系

1. “卡罗尔·达维拉”医学和药学大学医学遗传学主席，19-21岁，Dimitrie Gerota St.教授，020032，布加勒斯特，罗马尼亚

   Relu coco& Florina Raicu

2. “Francisc I. Rainer”人类学研究所，罗马尼亚学院，布加勒斯特，罗马尼亚

   Mihai Constantinescu & Florina Raicu

3. 基因组生命研究中心，布加勒斯特，罗马尼亚

   Relu可可ş

4. 国家内分泌学研究所C。I. Parhon”，布加勒斯特，罗马尼亚

   Sorina Schipor

5. 西班牙比兹卡亚巴斯克大学(UPV/EHU)遗传学、体质人类学和动物生理学系

   蒙特塞拉特赫尔维拉

6. Grigore T. Popa医学和药学大学免疫学系，雅西，罗马尼亚

   Petru Cianga

7. “Victor babe”罗马尼亚蒂米乌拉医学和药学大学

   罗克珊娜Popescu

8. 罗马尼亚医学和药学大学医学遗传学系Tîrgu mure, Tîrgu mure

   克劳迪娅Bănescu

9. 罗马尼亚康斯坦塔瓦奥维迪斯大学医学院医学遗传学系

   Alina Martinescu

相应的作者

对应到Florina Raicu．

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