引起小猫严重变形性皮炎的原因是Caryospora bigenetica

背景

Caryospora bigenetica是一种细胞内原生动物寄生虫，其主要寄主，通常是蛇，在肠道中被发现。伴随组织囊肿发育的肠外繁殖发生在次级宿主体内，后者通常是蛇的猎物。据报道，家畜的自然感染只发生在狗身上;这是…的第一份报告c . bigenetica猫感染。

案例展示

一只流浪小猫在被收容所收养后患上了结节性皮炎。主要在鼻梁、眼睑和耳部可见硬肿、结节和结痂。组织病理学和细胞学检查显示严重的脓肉芽肿性炎症伴丰富的细胞内生物提示顶复合体原生动物。开始使用克林霉素13 mg/kg治疗，每日两次，但由于病情恶化，猫被安乐死。经尸检，透射电镜证实该寄生虫起源于顶复合体，病原鉴定为c . bigenetica通过聚合酶链反应和DNA测序。

结论

我们提出了第一例自然发生的感染c . bigenetica在一只猫里。虽然最终的病因诊断依赖于分子鉴定，但大量无孢子卵囊和卵囊以及寄生虫在巨噬细胞和其他几种细胞类型中的有效繁殖可能使其与其他原生动物感染区分，并允许通过细胞学和组织病理学进行推定诊断。

球虫属的寄生虫Caryospora是感染爬行动物和猛禽的细胞内肠道寄生虫[1，2]。由于其对兽医和经济的影响较小，而且宿主范围很少包括家畜，因此该属传统上受到的关注少于许多其他球虫寄生虫[1]。属包括Caryospora bigenetica，该亚种以多种蛇类为主要寄主。这种寄生虫可能通过在粪便排泄后摄入卵母细胞或通过摄入受感染的啮齿动物而传播给蛇。啮齿类动物可能在摄入有孢子的粪源卵囊或摄入受感染的中间宿主(通常是啮齿动物)后被感染。在这两种情况下，寄生虫的肠外增殖发生与组织囊肿的发展。非啮齿动物在进食卵囊或寄生囊的组织时，可能会意外感染[1，2]。在小鼠中有成功的实验传播记录[1，3.]，棉鼠[1]，猪[3.和狗[1]，而自然感染只发生在狗身上[4，5]。据我们所知，本病例是猫自然感染的首例报告。

一只流浪小猫、它的妈妈和兄弟姐妹被一家猫咪收容所收养。小猫在一只耳朵的底部和鼻梁上有一些脱发结节(图2)。1a).收养后面部皮炎进展迅速，送兽医检查。除皮肤病学检查外，临床检查未见异常。血白细胞计数正常。抗猫免疫缺陷病毒(FIV)抗体、猫白血病病毒(FeLV)抗原和结膜拭子qPCR检测Chlamydophila猫属，猫杯状病毒，猫疱疹病毒，以及猫属支原体都是消极的。腹部超声在随访中无显著差异。总甲状腺素在参考范围内，拭子从皮肤病变处采集的细菌培养物未发生生长(样本位置未知，样本在转诊实验室检查)，总甲状腺素在参考范围内。最初的治疗包括注射醋酸甲基强的松龙和一个疗程的阿莫西林/克拉维酸(剂量未知)，但病情恶化。治疗改为强力霉素(6.2 mg/kg PO q12h)，导致轻微的暂时改善，即眼睑和耳部肿胀减轻。

由于皮肤病变的进展，小猫在最初的兽医检查10天后被转介给兽医皮肤科医生。在那里，经过全面检查，小猫很瘦，但很警觉。皮肤病学检查显示，鼻梁、脸颊和眼睑出现明显、坚硬、脱发性肿胀，遮挡了眼睛，扭曲了正常的解剖结构(图2)。1b).耳廓边缘严重增厚，有牢固的脱发结节，凹陷处有汇合的黄色外壳(图2)。1c).面部病变明显对称。四肢出现多灶性脱发结节，尾巴远端三分之一肿胀和脱发。两个楔形活检和细胞学和细菌学样本从耳廓病变。

细胞学(无花果。2A-c)显示脓肉芽肿性炎症伴巨噬细胞优势。巨噬细胞充满了许多多形性生物，其形态从微小的卵形嗜碱性结构到大泡沫球体和独特的香蕉形速殖子(速殖子)。

组织病理学(图2)3.A-c)，表皮水肿溃烂。可见高度细胞性、透皮性、严重弥漫性间质性炎症浸润，破坏了皮肤的正常结构。炎症反应主要由巨噬细胞组成，细胞浆呈苍白颗粒状。巨噬细胞内大量存在嗜碱性原生动物有机体，它们代表着顶复合体原生动物生命周期的发育阶段，存在于表皮和滤泡上皮的基底和棘层、成纤维细胞和内皮细胞中。细胞外也有少量生物存在。最丰富的阶段是无孢子的卵囊，表现为泡沫状、浅嗜碱性或浅紫色物质的荚膜聚集体，但顶端复合体原生动物无性和有性分裂的所有阶段都可以识别。周期性酸性希夫(PAS)染色突出了生物，除了zoites(图2)。3.d)。

细菌培养产生了不动杆菌nosocomialis通过MALDI-TOF质谱法(赫尔辛基大学兽医学院临床微生物学实验室)鉴定。

由于怀疑刚地弓形虫如感染，改用克林霉素(13.3 mg/kg PO q12h)治疗。收容所报告说，这只小猫很顽皮，胃口也很好。刚地弓形虫抗体滴度测定IgG的临界值为1:32,IgM抗体为阴性。

然而，小猫随后失去食欲，皮肤状况恶化，猫在转诊两周后被安乐死。在安乐死时，肿胀的眼睑遮住了眼睛(图2)。1d)双耳严重增厚、肿胀，严重前倾。在安乐死时获得组织病理学，透射电子显微镜(TEM)和PCR的补充活检样本。没有进行完整的尸检，但主人同意由主治兽医采集死后组织样本。从安乐死后的皮肤、口腔黏膜和内脏器官(下颌淋巴结、腘窝淋巴结、肝脏、肾脏、脾脏、肺和心脏)获得的组织病理学样本表明，感染已局限于皮肤和牙龈粘膜。

在超微结构上，寄生虫的发育阶段表现为典型的顶复合体原生动物(图2)。4)。

从酒精固定的组织样本中提取总DNA，并使用Yang等人描述的巢式PCR方法对18S rRNA位点进行巢式PCR扩增。6]。PCR产物纯化后，由赫尔辛基大学芬兰分子医学研究所FIMM技术中心测序组进行测序。测序反应结果使用SnapGene Viewer(来自insights Science的SnapGene软件;可以在https://www.snapgene.com/snapgene-viewer(使用日期2020年9月9日)。利用BLAST检索对GenBank中已有的顶复合体寄生虫18S序列进行比对。500碱基对扩增子序列分析显示，扩增子的同源性为501/501 (100%)c . bigenetica(GenBank登录号KT184332.1)。同源性百分比较低的命中记录为等孢子球虫属wiegmanniana和Schellackia胶18S核糖体基因部分序列。

报告引起皮炎的顶复原虫与痣内寄生虫在猫是罕见的。最著名的实体是皮炎相关弓形虫。在由100例经组织学证实的猫临床弓形虫病病例组成的病例系列中，100例中有2例涉及皮肤病变，但弓形虫不存在于体内[7]。报告1例播散性弓形虫病伴多发皮肤结节[8]，第二例为单个结节伴坏死性炎症，影响皮肤和乳腺组织[9]，第三例为皮肤溃疡及充血性结节[10]。在所有情况下，都是局部性的弓形虫检测到生物。正如一项实验性感染所表明的那样Neospora caninum能引起猫的全身性疾病[11]，n caninum当在发炎的猫皮肤上发现速殖子时，总是被认为是一种可能的病原体。的可能性n caninum必须考虑，因为大多数病例报告注意到阳性，因此，交叉反应性，无论是反-弓形虫和反n caninum免疫组织化学和血清学中的抗体。此外，有一例猫病例被描述为弥散性原生动物感染，伴有结节性皮肤病变和斑内速殖子。因为生物体表现出两者的形态特征n caninum和弓形虫，他们被称为弓形虫类生物[12]。这些病例与本病例的临床表现、组织学、细胞学和透射电镜结果相似。

寄生虫属的寄生虫Caryospora是爬行动物和猛禽的细胞内肠内的球虫。Caryospora可能利用主要寄主的猎物作为次要寄主[1，2]。本病例的感染源仍不清楚。Caryspora bigenetica芬兰以前没有感染的记录。芬兰大陆野生动物中只有两种蛇:蝰蛇(Vipera贝鲁)和草蛇(Natrix Natrix)。它们在芬兰很常见，分布很广，但它们的肠道寄生虫尚未被研究过。然而，一些蝰蛇科物种可能作为寄主Caryosporaspp。1]。实验感染表明，继发宿主可能通过蛇(原发宿主)排出的卵囊或食用带有卵囊的受感染继发宿主而感染[1，3.]。因此，小猫可能是通过口粪(蛇-小猫途径)或通过摄入第二宿主(蛇-老鼠-小猫途径)获得感染的。此外，虽然母猫和兄弟姐妹没有表现出感染的迹象，但不太可能由母猫经胎盘和乳原性感染传播给小猫(蛇/老鼠-水坝-小猫途径)。数字5说明在辅助主机中发生的生命周期阶段。

如果寄生虫从老鼠到蛇的循环在自然界中起着至关重要的作用，并且次级宿主可以通过食用受感染的老鼠而感染，那么我们应该更频繁地看到猫的病例，就像猫的情况一样弓形虫，弓蛔虫软件,等孢子球虫属种虫害感染。早期病例报告的缺乏表明c . bigenetica可能是一种机会性病原体，需要免疫功能低下的猫表现出感染。

从单一结节性皮肤病变到严重衰弱和变形的皮肤病进展迅速。年轻时可能容易c . bigenetica感染，如狗的感染[4，5]。在疾病发作后注射长效皮质类固醇可能会影响临床过程，正如在实验中感染的猫n caninum［10]。然而，年龄或流浪猫的压力不太可能导致显著的免疫抑制，从而导致这种罕见而严重的疾病;因此，一种未被注意到的免疫缺陷被怀疑。

临床鉴别诊断为深部细菌、真菌或原生动物感染。细菌培养产生了答:nosocomialis。致命感染鲍曼不动杆菌据报道在一只猫[13]。在本案中，答:nosocomialis被认为是继发感染的原因。

此处描述的猫病例的皮肤损伤类似于c . bigenetica -其他物种也有相关病变报道。感染c . bigenetica在小狗导致多灶性非脱发丘疹和结节在头部，躯干和四肢。耳廓、眶周区域和口部受到影响[4]。在一项实验研究中，接种卵囊的小鼠在感染后8天表现出口部肿胀、脚垫、阴囊(雄性)、部分闭上眼睑和嗜睡[3.]。在同一项研究中，受感染的猪表现为眼睑红斑，随后出现皮肤红斑和水肿，所有猪都表现出嗜睡[3.]。

最终的物种鉴定需要对PCR产物进行测序。在18s位点，本分离物与原菌株的同源性为100%，无间隙核仁孢子虫菌株，分子诊断被认为是肯定的。

如果没有PCR和测序，大量的无孢子卵囊和卵囊以及寄生虫在巨噬细胞和其他几种细胞类型内的有效繁殖构成了可能与其他原生动物感染区分的发现，以及基于细胞学或组织病理学的推定诊断。在研究的组织学切片中，几乎所有巨噬细胞都含有原生动物。检测成熟速殖子使鉴别诊断范围缩小到顶复合体原生动物;弓形虫,n caninum作为最可能的原生动物。然而，在本病例中，小的未成熟的巨噬细胞的分裂子是稀疏的利什曼虫无孢子卵囊与无孢子卵囊相似球孢子菌属的小球;因此，必须考虑几种感染性鉴别诊断。

在透射电镜下，该虫体的超微结构形态为典型的顶复球虫原生动物，但透射电镜无法进行种或属水平的鉴定。速殖子内的寄生体数量各不相同，但寄主细胞的膜结合液泡内主要发现寄生体是一种超微结构特征弓形虫比n caninum［14]。

中剂量克林霉素的治疗是由于怀疑刚地弓形虫类似原虫感染。一只患有皮肤核孢子病的罗威纳犬对克林霉素20 mg/kg和甲氧苄啶-磺胺甲恶唑23 mg/kg PO q12h有反应。5]。停止治疗后病情复发。由于该病例进展迅速且无法及时识别，因此没有采取进一步的治疗方法。

本文所述的病例在猫原生动物皮炎的病原体清单中又增加了一种顶复合体寄生虫，并表明猫可作为以下疾病的次级宿主c . bigenetica。

研究过程中使用和/或分析的数据集可根据通讯作者的合理要求提供。

我们感谢赫尔辛基大学生物技术研究所电子显微镜组提供的协助和使用的透射电子显微镜，感谢赫尔辛基大学芬兰分子医学研究所FIMM技术中心测序组提供的测序服务。

之前出版

此前没有公布相关数据。

这项研究是由赫尔辛基大学资助的。开放获取是由赫尔辛基大学图书馆资助的。

作者及单位

1. 兽医组织病理学实验室，由Vita实验室，Laivakatu 5f, 00150，芬兰赫尔辛基

   Seppo岛

2. Tammisto动物医院，Tammiston Kauppatie 29,01510，芬兰万塔

   Kirsti Schildt

3. 赫尔辛基大学兽医生物科学系，芬兰赫尔辛基57,00014邮政信箱

   Sanna Malkamäki & Antti Sukura

4. 萨洛维兽医诊所，Horninkatu 7,24100，芬兰萨洛

   乌拉Andersin

贡献

KS和UA对患者进行了临床检查。SS, KS和AS起草了手稿。SS和KS进行细胞学检查，SS进行组织病理学检查。SS拍摄了细胞学和组织病理学的显微照片。AS进行了TEM检查，并拍摄了TEM显微照片。SM负责PCR和DNA测序。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。

相应的作者

对应到桑娜Malkamaki。

伦理批准并同意参与

这项研究不需要官方或机构的伦理批准。这只动物是按照高道德标准和国家法律处理的。

发表同意书

猫的主人授权使用数据，包括医疗信息和临床照片，并报告病例细节，尽管在公布的病例报告中可以识别出单个动物。

相互竞争的利益

作者没有竞争利益需要申报。

出版商的注意

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